文档介绍：细胞生物学研究技术
福建农林大学生命科学学院
张健
一细胞形态结构的观察方法
(一)、光镜技术
1、几种常见光学显微镜
A 普通光学显微镜
普通生物显微镜由3部分构成,即:①照明系统,包括光源和聚光器;②光学放大系统,由物镜和目镜组成,是显微镜的主体;③机械装置,用于固定材料和观察方便。
※分辨率与放大倍数
分辨率:指显微镜能分辨物体最小间隔的能力,分辨力的大小决定于光的波长和镜口率以及介质的折射率,用公式表示为:
R=.
其中 .=nsinα/2
(n=介质折射率;α=镜口角;.=镜口率; λ=入射光波长)
放大倍数=物镜倍数目镜倍数=(500-1000)
部分介质的折射率
介质空气水香柏油α溴萘
折射率 1
普通光线的波长为400~700nm,。
B 暗视野显微镜
使用特殊的照明方法,使照明光线不直接进入物镜,只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜,因而视野的背景是黑的,物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4~200nm的微粒子,分辨率可比普通显微镜高50倍。
应用:观察未经染色的活体或胶体粒子。
C 相差显微镜(PCM)
1953年获得诺贝尔物理奖,相差显微镜的基本原理是,把透过标本的可见光(直射光和衍射光)的光程差变成振幅差,从而提高了各种结构间的对比度,使各种结构变得清晰可见。
应用:观察未经染色的标本和活细胞。
一种介壳虫的染色体(PCM照片)