基因敲除.pptx

文档介绍：基因敲除的概念
基因敲除的发展历程
基因敲除的几种方法
基因敲除的应用前景
基因敲除现存的缺点
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基因敲除: 是基因打靶技术的一种。
概念：是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将该基因去除，或用其它顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动物，推测相应基因的功能。
切除部分 --- 观察整体--- 推测功能
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：80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功
2. 基因敲除的理论基础：1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在
3. 80年代后半期，DNA同源重组原理发展起来诞生了基因敲除这样一门新技术。
，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。
，基因敲除技术得到了进一步的发展和完善。
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利用基因同源重组进行基因敲除
条件性基因敲除法
诱导性基因敲除法
利用随机插入突变进行基因敲除
基因捕获法
RNAi引起的基因敲除
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以下两种是新方法：
（Triple helix forming oligonucleotides）引子生物学理导的基因敲除术

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a． 基因载体的构建
b．ES 细胞的获得
c．同源重组
d. 选择筛选已击中的细胞
e．表型研究
f．得到纯合体
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定义:将某个基因的修饰限制于小鼠某些特定类型的细胞或发育的某一特定阶段的一种特殊的基因敲除方法。
它实际上是在常规的基因敲除的基础上，利用重组酶Cre介导的位点特异性重组技术，在对小鼠基因修饰的时空范围上设置一个可调控的“按钮”，从而使对小鼠基因组的修饰的范围和时间处于一种可控状态。
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诱导性基因敲除是利用控制CRE表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将表达系统转移到动物体内的过程在时间的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修之目的的基因敲除技术
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此法利用某些能随机插入基因序列的病毒，细菌或其他基因载体，在目标细胞基因组中进行随机插入突变，建立一个携带随机插入突变的细胞库，然后通过相应的标记进行筛选获得相应的基因敲除细胞
在此方法下，还出现了一种新的方法：基因捕获法
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