文档介绍：微生物实验技术
第七章
微生物检验技术
微生物检验技术
实验7-1 食品中细菌总数测定
实验7-2 食品中大肠菌群测定
实验7-3 食品中霉菌计数法
实验7-4 食品中金黄色葡萄球菌检验
实验7-1 食品中细菌总数测定
一、实验目的
了解食品中细菌的检测方法。
二、实验原理
菌落总数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果,只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
实验7-1 食品中细菌总数测定
三、实验材料
,冰箱,天平,电炉,恒温水浴锅,培养皿,lmL和l0mL吸管,500mL三角瓶,玻璃珠,培养皿,试管,酒精灯,试管架,灭菌刀或剪刀,灭菌镊子,酒精棉球。
,牛肉膏蛋白胨培养基,75%乙醇,生理盐水或其它稀释液定量分装于三角瓶和试管内灭菌。
实验7-1 食品中细菌总数测定
四、实验方法
菌落总数的检验程序见图7-1所示。
(一)检样稀释及培养
,将饮料检样25mL放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)内,经充分振摇制成1∶10的均匀稀释液(如为固体检样最好用均质器,以8000~10000r/min的速度处理1分钟,作成1∶10的均匀稀释液)。
∶10稀释液lmL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混合均匀,作成1∶100的稀释液。
实验7-1 食品中细菌总数测定
图7-1 菌落总数检验程序
实验7-1 食品中细菌总数测定
,按上项操作顺序,作10倍递增稀释,如此每递增稀释一次,即换用1支lmL灭菌吸管,直至稀释到所需浓度。
,选择2~3个适宜稀释度分别用吸取该稀释度的吸管移lmL稀释液于灭菌皿内,每个稀释度作两个平皿。
,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置46℃水浴保温)注入平皿约15mL,并转动平皿混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有lmL灭菌水(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。
,翻转平板,置36±1℃温箱内培养24±2小时。
实验7-1 食品中细菌总数测定
(二)菌落计数方法
作平板菌落计数时,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏,在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落数。
(三)菌落计数的报告
选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板的平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2代表全皿菌落数。
实验7-1 食品中细菌总数测定
(1)应选择平均菌落数在30~300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之(见表7-1中例1)。
(2)若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30~300之间,则视二者之比如何来决定,若比值小于2,应报告其平均数;若大于2,则报告其中较小的数字(见表7-1中例2及例3)。
(3)若所有稀释度的平均菌落均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表7-1中例4)。
(4)若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表7-1中例5)。
实验7-1 食品中细菌总数测定
(5)若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表7-1中例6)。
(6)若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表7-1中例7)。
菌落数在100以内时,按其实有数报告;大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示(见表7-1中“报告方式”栏)。
五、实验报告
用器皿图解的形式列出食品中菌落总数检验程序图。