文档介绍：微生物实验技术
第三章
微生物的鉴定
微生物的鉴定
实验3-1 微生物的形态观察
实验3-2 细菌特殊结构的观察
实验3-3 革兰氏染色法
实验3-4 微生物大小测定与计数
实验3-5 微生物的理化性能鉴定
实验3-1 微生物的形态观察
一、实验目的
1. 学习微生物涂片、染色的基本技术。
2. 掌握微生物的简单染色法。
3. 熟悉细菌、放线菌、酵母菌、霉菌在形态上的主要区别。
二、实验原理
微生物的细胞小而透明,在普通光学显微镜下不易识别,必须借助于染色,使菌体着色以增加菌体的显示力,从而更清楚地观察到其形态和结构。
实验3-1 微生物的形态观察
在微生物形态观察中,根据不同的种类,需采用不同的染液和染色方法。
染色前必须固定微生物,其目的有二:一是杀死微生物并使菌体粘附于载玻片上;二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法,固定时应尽量维持细胞的原有形态,防止细胞膨胀或收缩。
实验3-1 微生物的形态观察
三、实验材料
1. 菌种与染料根据不同的菌种采用不同的染液,见表3-1和附录Ⅳ。
2. 仪器和其他用品显微镜,接种环,解剖刀,镊子,酒精灯,载玻片,盖玻片,石蜡油,吸水纸,擦镜纸。
表3-1 不同微生物种类所使用的染液
微生物类群
细菌
放线菌
酵母菌
霉菌
菌种
大肠杆菌
细黄链霉菌
米酒酵母
根霉
染液
番红
石炭酸复红
吕氏美兰
乳酸石炭酸棉蓝
实验3-1 微生物的形态观察
四、实验方法
(一)细菌、酵母菌的染色
染色操作程序为:
涂片——干燥——固定——染色——水洗——干燥——油镜观察。
1. 涂片取干净载玻片,于中央加蒸馏水一小滴,将接种环在火焰上灼烧灭菌,冷却后,取试管斜面一支,按无菌操作法用接种环从菌种斜面表面挑取细菌少许(注意不要挑破培养基),涂在载玻片水滴中,涂面约为1cm2的均匀薄膜。如果是液体培养物则不必加水,直接取菌液1~2环涂片,接种环经灭菌后放回原处。无菌操作及做涂片的过程见图3-1。
实验3-1 微生物的形态观察
图3-1 无菌操作及做涂片的过程
实验3-1 微生物的形态观察
,但不能直接在火焰上烘烤,以免菌体变形。
,有菌膜的一面向上,迅速通过火焰2~3次,使菌体固定于载玻片上,待载玻片冷却后,再加染料。
,加适量(以盖满菌膜为度)番红染液或吕氏美兰染液于菌膜部位,染色1~2分钟。
,用洗瓶中的自来水自载玻片一端轻轻冲洗,至流下的水中无染色液的颜色时为止。
。先用低倍镜找到物像后再用油镜观察。
实验3-1 微生物的形态观察
(二)放线菌、霉菌的染色
,置于载玻片中央,先用另一载玻片使劲挤压有菌部分,使得菌群铺成一薄层,然后将载玻片中央置于酒精灯火焰上方加热,使培养基融化,冷却后,在载玻片的中央有菌部分滴加2滴石炭酸复红或乳酸石炭酸棉蓝染液,再轻轻盖上盖玻片,注意避免产生气泡。
2. 镜检先用低倍镜观察,再换高倍镜观察。
五、实验报告
绘出所观察到的各种微生物的形态。
返回
实验3-2 细菌特殊结构的观察
一、实验目的
;
,观察细菌鞭毛的形态特征;
。
二、实验原理
细菌的芽孢具有厚而致密的壁,透性低,着色、脱色都比营养细胞困难。芽孢染色法就是根据这一特点设计的:采用一着色力强的染料,并用微火加热,使菌体和芽孢同时着色后再用水洗,使菌体脱色而芽孢仍保留已着的颜色。