文档介绍：第五讲分子生物学研究法
一、重组DNA技术发展史上的重大事件
二、基因操作的主要技术原理
三、分子克隆技术
四、 DNA的Microarray
一、重组DNA技术发展史上的重大事件
,即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质,解决了遗传的物质基础问题;
,解决了基因的自我复制和世代交替问题;
,相继提出了"中心法则"和操纵子学说,成功地破译了遗传密码,充分认识了遗传信息的流动和表达。
1869  F Miescher首次从莱茵河鲑鱼精子中分离DNA。
1944 . Avery证实DNA是遗传物质。
1952 . 。
1953 。-射线衍射法证实了这一结构。
1957  。
1958  M. Meselson和F. W. Stahl提出了DNA的半保留复制模型。
1959-1960 S. Ochoa发现RNA聚合酶和信使RNA,并证明mRNA决定了蛋白质分子中的氨基酸序列。
1961Nirenberg破译了第一相遗传密码;F. Jacob和J. Monod提出了调节基因表达的操纵子模型。1964 C. Yanofsky和S. Brenner等人证明,多肽链上的氨基酸序列与该基因中的核苷酸序列存在着共线性关系。
1965 S. W. Holley完成了酵母丙氨酸tRNA的全序列测定;科学家证明细菌的抗药性通常由“质粒”DNA所决定。
1966 ,、、。
,。。
1972-1973 ,,于72年获得第一个重组DNA分子,73年完成第一例细菌基因克隆。
1975-1977 、。
1977年完成了全长5387bp的噬菌体φ174基因组测定。
1978 首次在大肠杆菌中生产由人工合成基因表达的人脑激素和人胰岛素。
1980美国联邦最高法院裁定微生物基因工程可以专利化。
1981R. D. Palmiter和R. L. Brinster获得转基因小鼠;A. C. Spradling和G. M. Rubin得到转基因果蝇。
1982美、英批准使用第一例基因工程药物--胰岛素;Sanger等人完成了入噬菌体48,502bp全序列测定。
1983 获得第一例转基因植物。
1984 斯坦福大学获得关于重组DNA的专利。
1986 GMO首次在环境中释放。
1988 J. D. Watson出任“人类基因组计划”首席科学家。
1989DuPont公司获得转肿瘤基因小氧--“ouse”。
1992 欧共体35个实验室联合完成酵母第三染色体全序列测定(315kb)
1994第一批基因工程西红柿在美国上市。
1996完成了酵母基因组(×107bp)全序列测定。
1997英国爱丁堡罗斯林研究所获得克隆羊。
基因工程中常见的名词: 遗传工程--ic engineering,基因操作--gone manipulation,基因克隆--gone cloning, 重组DNA技术--binant DNA technology,分子克隆--molecular cloning。
基因工程的主要内容或步骤: 1. 从生物有机体基因组中,分离出带有目的基因的DNA片段。 2. 将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制的并具有选择记号的载体分子上,形成重组DNA分子。 3. 将重组DNA分子转移到适当的受体细胞(亦称寄主细胞)并与之一起增殖。 4. 从大量的细胞繁殖群体中,筛选出获得了重组DNA分子的受体细胞,并筛选出已经得到扩增的目的基因。 5. 将目的基因克隆到表达载体上,导入寄主细胞,使之在新的遗传背景下实现功能表达,产生出人类所需要的物质。