文档介绍：肿瘤干细胞在人结肠癌细胞株HT29耐奥沙利铂中的作用探讨结肠癌奥沙利铂
摘要 目标 探讨肿瘤干细胞cancer stem cell，CSC在人结肠癌细胞株HT29对奥沙利铂L-OHP产生取得性耐药中的作用。 方法 采取浓度递增法诱导产生人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HT29/L-OHP。采取As2O3逆转HT29/L-OHP的耐药性。采取MTT法检测As2O3逆转前后HT29/L-OHP的增殖能力和对L-OHP的敏感性。采取实时荧光定量PCR检测As2O3逆转前后HT29/L-OHP中Sox-2、miR-200c和let-7的表示。 结果 ①在L-OHP12 μmol/L 的作用下，HT29/L-OHP的增殖能力显著高于HT29P 。HT29和HT29/L-OHP对L-OHP的IC50分别为 μmol/L和 μmol/L，耐药指数为。② mg/L 的As2O3预处理后，降低了HT29/L-OHP对L-OHP的耐药性，逆转倍数为，相对逆转效率为%。③相对于HT29，HT29/L-OHP中Sox-2的表示显著增加±比±P As2O3对HT29/L-OHP细胞耐药性的逆转
依据细胞毒性试验结果，选择无细胞毒剂量的As2O3进行试验。加入As2O3 72 h后测定HT29/L-OHP细胞对L-OHP的敏感性，计算IC50，并计算逆转倍数和相对逆转效率。逆转倍数=HT29/L-OHP 的IC50/加入As2O3后HT29/L-OHP 的IC50。相对逆转效率=HT29/L-OHP逆转前IC50- HT29/L-OHP逆转后IC50/ HT29/L-OHP逆转前IC50- HT的IC50。
实时荧光定量PCR
引物设计 采取引物在线软件设计引物并检测分析，最终由上海生物工程有限企业合成，引物序列5"→3"见表1。
总RNA的提取和逆转录 取对数生长久的耐药株和亲本株HT29细胞，采取RNA提取试剂盒提取总RNA并进行逆转录反应，得到的cDNA用于实时荧光定量PCR。
实时荧光定量PCR反应 反应体系：SYBR Premix Ex TaqTM 2× 10 μL，Forword primer μL，Reverse primer μL，ROX Reference Dye50× μL，cDNA 2 μL，dH2O μL。反应条件：95℃变性15 min，扩增40循环，每循环变性15 s，60℃退火30 s，72℃ 30 s。采取△△Ct法进行相对定量分析。
统计学方法
采取SPSS 统计软件包进行数据处理，计量资料进行方差齐性分析和正态分布检验，方差齐且呈正态分布的数据，组间比较采取单原因方差分析；方差不齐或非正态分布数据均进行变量变换，变换后再进行方差齐性分析和正态分布检验，若变换后仍方差不齐或非正态分布的数据，对其进行非参数检验。以P ，不过在第3～7天，HT29/L-OHP细胞增殖速度显著高于HT29细胞P 图1，HT29/L-OHP细胞的倍增时间靠近于无L-OHP作用的HT29细胞 h。MTT结果显示，HT29/L-OHP细胞的IC50为 μmol/L，HT29细胞的IC50为 μmol/L，RI为。
As2O3细胞毒性试验结果
结果表明， mg/L的As2O3对HT2