文档介绍：华中科技大学博士学位论文
列是从基因序列推导而来的,我们首次从蛋白质水平上分离纯化出了该多肽。
4、采用扫描电镜技术,发现蝇蛆抗菌肽 Muscatoxin 能破坏 G+菌(枯草杆菌、苏
云金芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌)和 G-菌(铜绿假单孢菌、大肠杆菌)的细胞膜,使其
形成穿孔,原生质泄漏而死亡;
5、蝇蛆抗菌肽 Muscatoxin 能杀灭单核白血病癌细胞(THP-1)。经 Muscatoxin
(2mg/ml)处理后,白血病癌细胞的贴壁性很快被破坏,大量细胞悬浮并死亡。扫描
电镜观察发现,悬浮细胞的细胞间质明显减少,细胞形态发生变化,细胞膜出现大量
穿孔、原生质泄漏,细胞破裂死亡。Muscatoxin 对癌细胞和细菌的杀灭机制相同;
6、蝇蛆抗菌肽 Muscatoxin 有一定的哺乳动物细胞毒性。在高浓度(2 mg/ml)情
况下能破坏小鼠全部血细胞的细胞膜,而在低浓度( mg/ml)情况下仅杀死白细
胞,对小鼠的红细胞影响不大,但红细胞的形态变得更圆;
7、采用膜片钳技术,发现 mM 级浓度的蝇蛆抗菌肽 Muscatoxin 能在胰腺β-细胞
上形成阳离子通道,而在原生受体和离子通道少的人胚胎肾细胞(HEK293)上不能形成
通道。说明 Muscatoxin 能与β-细胞上特定的受体相互作用后再使细胞膜穿孔形成离子
通道,而且这种穿孔效应不依赖于胞外 Ca2+的作用;
8、采用胞内荧光测钙技术,发现 mM 级浓度的 Muscatoxin 使胰腺β-细胞膜穿
孔后外钙内流,使得胞内钙浓度升高,这种作用与 Muscatoxin 的剂量无关,具有累积
效应。Muscatoxin 的作用浓度降低到 fM 级后仍有明显的效果,Muscatoxin 对细胞膜
的穿孔作用很强。
9、从黑果蝇的蝇蛆中分离纯化出另一个新抗菌肽 SK84,并测出其全部蛋白序列。
SK84 与 Muscatoxin 属于同一抗菌肽家族,并与其它种类的果蝇假蛋白有很高的同源
性。SK84 在 1-100 μM 范围内无溶血活性。SK84 对单核白血病(THP-1)、肝癌(HepG2)、
乳腺癌(MCF-7)等细胞有抑制作用,但对人胚胎肾细胞(HEK293)、仓鼠卵巢(CHO)
细胞无影响。
关键词:家蝇蛆,果蝇蛆,抗菌肽,杀菌活性,抗癌活性,细胞膜穿孔,离子通道,
扫描电镜,膜片钳,胞内荧光测钙
II
华中科技大学博士学位论文
Abstract*
Musca domestica, which belongs to insecta, diptera, cyclorrhapha, muscidae,
is the mon muscae and the richest resource. It is very significant and valuable to
isolate antibacterial peptides from Musca domestica and to develop these peptides into
antibacterial medicine. Due to purify a pure peptide from the natural materials (animal,
plant and anism tissue) is very difficult plex, few research is going on.
For the first time, we have purified a novel antibacterial peptide and designed as
Muscatoxin based on its bioactivity and resource from larvae of Musca domestica. We have
also chemically and biologically characterized the peptide Muscatoxin.
1、A group of antibacterial peptides had been isolated from larvae of Musca
domestica by a number of batch-wise biochemistry separation followed by several
chromatography steps. The antibacterial peptides had characters of broad antibacterial
spectrum