文档介绍：人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子( GM-CSF )酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用预期应用 ELISA 法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中粒细胞巨噬细胞集落刺激因子( GM-CSF )含量。实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗 GM-CSF 抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗 GM-CSF 抗体、 HRP 标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物 TM B 显色。 TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 GM-CSF 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值), 计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板:一块( 96 孔) 2. 标准品(冻干品): 2 瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml ,盖好后静置 10 分钟以上,然后反复颠倒/ 搓动以助溶解,其浓度为 1000 pg/ml ,做系列倍比稀释后,分别稀释 10 00 pg/ml , 500 pg/ml , 250 pg/ml , 125 pg/ml , pg/ml , pg/ml , pg/ml ,样品稀释液直接作为标准浓度 0 pg/ml ,临用前 15 分钟内配制。如配制 500 pg/ml 标准品:取 (不要少于 ) 1000 pg/ml 的上述标准品加入含有 0. 5ml 样品稀释液的 Eppendorf 管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液: 1 × 20ml/ 瓶。 4. 检测稀释液 A : 1 × 10ml/ 瓶。 5. 检测稀释液 B : 1 × 10ml/ 瓶。 6. 检测溶液 A : 1 × 120ul/ 瓶( 1:100 )临用前以检测稀释液 A 1:100 稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔 100ul ),实际配制时应多配制 - 。如 10ul 检测溶液 A 加 990ul 检测稀释液 A 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液 B : 1 × 120ul/ 瓶( 1:100 )临用前以检测稀释液 B 1:100 稀释。稀释方法同检测溶液 A 。 8. 底物溶液: 1 × 10ml/ 瓶。 9. 浓洗涤液: 1 × 30ml/ 瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释 25 倍。 10. 终止液: 1 × 10ml/ 瓶( 2N H2SO4 )。 11. 覆膜: 1 × 5 张标本的采集及保存 1. 血清:全血标本请于室温放置 2 小时或 4 ℃过夜后于 1000 x g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20 ℃或-80 ℃保存,但应避免反复冻融。 2. 血浆:可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂,标本采集后 30 分钟内于 2 - 8 ° C 1000 x g 离心 15 分钟,或将标本放于-20 ℃或-80 ℃保存,但应避免反复冻融。 3. 细胞培养物上清或其它生物标本:请 1000 x g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20 ℃或-80 ℃保存,但应避免反复冻融。注:以上标本置 4 ℃保存应小于 1 周, -20 ℃或-80 ℃均应密封保存, -20 ℃不应超过 3 个月