文档介绍：小鼠Apelin 12 (AP12)酶联免疫吸附测定试剂盒
使用说明书
产品编号：E-EL-M0128
（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）
声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组AP12浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。
试剂盒组成：
名称-中文
名称-英文
规格
保存条件
ELISA酶标板
Micro ELISA Plate
8×12 / 8×6*
4℃
冻干标准品
Reference Standard
2/ 1支*
4℃
标准品&样品稀释液
Reference Standard & Sample Diluent
1瓶 20mL/12mL*
4℃
浓缩生物素化抗体
Concentrated Biotinylated Detection Ab
1支 120μL/70μL*
4℃
生物素化抗体稀释液
Diluent for Biotinylated Detection Ab
1瓶 10mL/6mL*
4℃
浓缩HRP酶结合物
Concentrated HRP Conjugate
1支 120μL/70μL*
4℃(避光)
酶结合物稀释液
Diluent for HRP Conjugate
1瓶 10mL/6mL*
4℃
浓缩洗涤液（25×）
Concentrated Wash Buffer （25×）
1瓶 30mL/16mL*
4℃
底物溶液（TMB）
Substrate Reagent
1瓶 10mL/6mL*
4℃(避光)
反应终止液
Stop Solution
1瓶 10mL/6mL*
4℃
封板覆膜
Plate Sealer
5/3张*
产品说明书
Product Description
1份
*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠AP12抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的AP12会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠AP12抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠AP12抗体与结合在包被抗体上的小鼠AP12结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，AP12浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中AP12的浓度。
标本收集:
血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内***试管。
血浆：，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。
组织匀浆：用预冷的PBS (, pH=)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。
细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
（具体处理方法可参考：?tid=477 ）
标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融，1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。
如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验，以确定稀释倍数)。
试验所需自备物品:
酶标仪(450nm波长滤光片)
高精度移液器，EP管及一次性吸头：-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL