文档介绍：大花惠兰、石斛兰的组织培养(1) 材料与方法材料: 大花蕙兰大花品种嫩芽。将母株放在温室内盆栽培养,于2~5月陆续从母株上取 8 cm 左右的新芽, 剥去最外几层叶片, 去芽的上半段, 然后在超净工作台上采用三步灭菌处理法处理: 先在 70 % 的酒精中处理 6s, 立即投入 10 % 的次氯酸钠溶液中 10 min , 稍加摇动, 取出后用无菌水冲洗, 剥去外层 2~3 枚叶片; 再放入 5% 的次氯酸钠溶液中 5 min , 取出后无菌水冲洗, 剥至最后 1 枚叶片; 再放入 1% 的次氯酸钠溶液中 1 min , 取出后无菌水冲洗数次。以上次氯酸钠溶液中均加入 Tween20 以利杀菌剂更有效地发挥作用, 在无菌条件下剥出约 5 mm 长地茎尖, 以生长点为中心, 用解剖刀把茎尖切成 4 个小方块, 分别接入已经准备好的培养基上。培养基: 原球茎诱导培养基配方: MS + mg/ L BA +1. 0 mg/ L KT +2 g/L 活性炭( active carbon , AC )。原球茎增殖培养基配方为:MS + 0. 5 mg/ L BA + 0. 8 mg/ L2 ,42D +2 g/L AC, 。幼苗分化及生根养基配方为:MS + KT 1 mg/ L+ NAA 0. 5mg/ L +2 g/L AC 。培养条件培养基 pH ~ , 琼脂粉 %~ %, 活性炭 %的, 防止褐变, 培养室温度 22 ~ 25 ℃, 相对湿度 40 %, 光照 12 h/d, 光照强度为 2 000 lx 。(2) 结果观察原球茎诱导: 把茎尖切成的小块, 接入圆球茎诱导培养基上, 20 天后( 或更长时间) 观察有无圆球茎出现。结果调查: 圆球茎的诱导率= 产生圆球茎的茎尖数/ 接种茎尖数× 100 %。原球茎增殖: 将诱导形成的较大原球茎块切割成直径 3~8 mm 左右的小块, 接种在圆球茎增殖培养基上。 1 个月后统计增殖量, 结果调查: 原球茎增殖率= 有新原球茎的块数/ 接种块数× 100 %。幼苗分化及生根: 将增殖的充分成熟的较大原球茎块切割成直径 3~ 8 mm 的小块, 接种在原球茎分化及生根培养基上。 45 d 后统计分化率、生根率及根系生长状态。结果调查: 幼苗分化率= 出芽数/ 圆球茎个数× 100 %。幼苗生根率= 生根幼苗数/ 幼苗数× 100 %。壮苗、驯化与移栽: 壮苗。 1/ 2MS ,7% 琼脂, pH ~,5~ 6 周后植株长出粗壮的根系。光照 2 000 lx ; 容器: 23 cm × 30 cm ×8 cm 四周镂空的塑料框; 将瓶苗从培养室( 恒温室) 移至与外界相通的室内放置 2d 后, 去瓶盖炼苗 3-7 d, 洗净瓶苗根部的培养基,用 1000 倍甲基托布津或多菌灵浸泡组培苗根部, 放置于通风阴凉处晾干水分至根系发白变软, 即可用于移栽; 基质。水苔和谷(麦)壳2: 河沙 1: 珍珠岩 1( 体积, 是大花蕙兰组培苗假植的理想基质; 白天平均温度在 20 ℃以上, 夜间温度在 15 ℃左右。假植相对湿度控制在 80% 以上。晴天上午 10: 00 至下午 5: 00, 作 70% 的遮荫处理,大花蕙兰刚出瓶的植株很小、十分脆弱, 放置处要求光照弱, 种