文档介绍：大肠杆菌的检测：大肠菌群测定的操作细则
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便 ,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量 , 推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以 100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
设备和材料
温箱：36± 1C。冰箱:0 〜4 C。恒温水浴： ± C。天平。
显微镜。均质器或乳钵。平皿:直径为 90mm。试管。吸管。广口瓶或三角烧瓶：容量为 500mL。玻璃珠：直径约 5mm。载玻片。酒精灯。
试管架。
培养基和试剂
乳糖胆盐发酵管：按 GB 中规定。
伊红美蓝琼脂平板：按 GB 中规定。
乳糖发酵管：按 GB 中规定。
EC 肉汤：按 GB 中规定。
磷酸盐缓冲稀释液：按 GB 中规定。
生理盐水。
革兰氏染色液：按 GB 中规定。
检样稀释
(或 g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠 )或灭菌乳钵内 ,经充分振摇或研磨做成 1：10 的均匀稀释液。固体检样最好用均质器 ,以 8 000-10 000 r/min 的速度处理 1min, 做成 1：10 的均匀稀释液。
:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内 , 振摇试管混匀 , 做成 1：100 的稀释液。
，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支 1mL灭菌吸管。
根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计 ,选择三个稀释度 , 每个稀释度 ,接种 3管。
乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及
1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种 3管，置36± 1 C温箱内，培养24± 2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。
分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36± 1C温箱内，培养18-24h，然后取
出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。
证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落 1-2 个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置 36± 1C温箱内培养24± 2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。
报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN佥索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN®。
4 粪大肠菌群 (faecal coliform)
（）转种于EC肉汤管内，置
±