文档介绍：实验二细菌的染色和
细菌细胞构造的观察
•目的要求
•染色剂和染色的原理
•实验材料
•实验程序
•思考题
目的要求
•学习微生物涂片
•掌握细菌的一般染色法和革兰氏染色
•进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术
•观察和识别细菌细胞的特殊构造
染色剂和染色原理
微生物染色的基本原理: 是借助物理和化学因素的作用而进行
的。物理因素如:细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸
附作用等。化学因素如:正负离子之间的相互吸引等。
染色剂: 染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型:
1. 酸性染料:如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑等。
2. 碱性染料:一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶
紫、美兰、甲基紫等,细菌易被碱性染料染色。
3. 中性(复合)染料:如伊红、美兰等,Wright染料和Gimsa
染料等(常用于细胞核染色)。
4. 单纯染色:这类染料的化学亲和力低,大多是偶氮化合物,
不溶于水,但溶于脂肪溶剂中,如苏丹类(Sudan b)的染料。
染色剂和染色原理:
微生物染色常用染料
实验材料
•涂片染色用的细菌培养物
(Escherichia coli) 24h的斜面培养物。
(Bacillus subtilis) 12—16h的斜面培养物。
•载玻片、接种环、镊子、酒精灯、各种染色液、火
柴、无菌牙签、玻璃铅笔、蒸馏水。
•显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸、二甲苯等。
•示范片
(Bacillus subtilis)的芽孢;
(Bacillus mucillaginosus)的荚膜;
。
实验程序:
(细菌染色的方法和步骤)
•细菌染色的方法:
• 1. 单染色法:用一种染色液染菌体后,就可以观察
微生物的大小、形状、和细胞排列状况,但不能鉴
别微生物以及它的特殊构造等。
2. 复染色法:用两种或两种以上染色液进行染色,
有协助鉴别微生物的作用,故也称鉴别染色法。常
用的有:革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色
法、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等。
•染色技术的一般过程
涂片干燥固定染色媒染脱色复染
水洗干燥镜检
实验程序:
(简单染色的方法和步骤)
简单染色法(一般染色法)
:细菌培养物
:自然气干或酒精灯
高处微微加热。
4固定
:在整个涂面上滴加
齐氏石炭酸复红,染色1分
钟。
:倾去染液,用自来
水细流冲洗至流下的水中无染
料颜色为止。
7干燥:空气中自然干燥。8
镜检:在油镜下观察牙垢中的
各种细菌形态并绘图。
实验程序:
(革兰氏染色的方法和步骤)
革兰氏(Gram)染色法
1. 涂片
2. 初染:在做好的涂面上滴加草
酸铵结晶紫染液,染1分钟,倾
去染液,流水冲洗至无紫色。
3. 媒染:先用新配的路哥氏碘液
冲去残水,而后用其覆盖涂面1
分钟,后水洗。
4. 脱色:除去残水后,滴加95%
酒精进行脱色约30秒,后立即用
流水冲洗。
5. 复染:滴加番红染色液,染1
分钟,水洗后用吸水纸吸干。
6. 镜检:观察染色结果并绘图。
实验程序:
(荚膜染色的方法和步骤)
荚膜染色法(示范):
荚膜薄,易变形,因此在涂片过程中不能
用加热固定。
1. 取斜面培养72h左右的胶质芽孢杆菌涂
片,自然干燥,自然固定。
2. 染色:在已自然晾干的涂面上,滴加1%
结晶紫染色液染色2min,以20%硫酸铜冲
洗数次,再用自来水冲洗1次,晾干。
3. 镜检:油镜观察示范片并绘图(菌体红
色,荚膜无色)。
实验程序
(鞭毛染色的方法和步骤)
•菌液的制备及涂片:菌种应预先连续传代5—6代。
1. 接种:—1mL无菌水,取活化的枯草
杆菌1—2环菌苔,接种于无菌水中,300C 培养15—18h。
2. 制备菌液:挑取斜面底部近水面处菌苔数环,移入1mL与
菌种同温的无菌水中,在280C温箱中保温10min。
3. 鞭毛涂片:先用悬滴法观察其运动性,若运动性很强,即
可涂片。涂片后自然干燥、固定。
•染色:染色液必须新配制,涂片必须充分晾干才能染色。
1. —8min左右。
2. 倾去A液,再加鞭毛染色液B液染3—5min,水洗,自然干
燥。
,水洗、晾干、镜检。
•油镜下观察鞭毛的