文档介绍：免疫荧光技术威斯腾生物技术中心威斯腾生物成立 12 周年庆 1主要内容技术原理 1 实验流程 2 注意事项 3 常见问题 4 2 免疫荧光技术(immunofluorescence) 技术原理将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出,荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),可以看见荧光所在的细胞或组织,利用定量技术测定含量,从而可对抗原进行细胞定性和定位分析。3 根据实验方法分类: ?直接法?间接法?补体法?其他 45 补体法: 利用补体反应,通过形成抗原-抗体-补体复合物发射荧光。 6 其他免疫荧光技术: ?时间分辨免疫荧光分析?荧光偏振免疫分析技术 7 时间分辨免疫荧光测定时间分辨荧光免疫测定( TRFIA )是一种非同位素免疫分析技术, 它用镧系元素标记抗原或抗体,根据镧系元素螯合物的发光特点, 用时间分辨技术测量荧光,同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨,可有效地排除非特异荧光的干扰,极大地提高了分析灵敏度。 8 荧光偏振免疫分析技术荧光偏振免疫分析法(fluorescence polarization immunoassay ,FPIA) 是一种定量免疫分析技术,其基本原理是荧光物质经单一平面的蓝偏振光(485nm) 照射后,吸收光能跃入激发态,随后回复至基态,并发出单一平面的偏振荧光(525nm) 。偏振荧光的强弱程度与荧光分子的大小呈正相关,与其受激发时转动的速度呈反相关。 FPIA 最适宜检测小至中等分子物质,常用于药物、激素的测定。 9 激光共聚焦扫描显微镜(Confocal laser scanning microscope ,CLSM ) 用激光作扫描光源,逐点、逐行、逐面快速扫描成像,扫描的激光与荧光收集共用一个物镜,物镜的焦点即扫描激光的聚焦点,也是瞬时成像的物点。系统经一次调焦,扫描限制在样品的一个平面内。调焦深度不一样时,就可以获得样品不同深度层次的图像,这些图像信息都储于计算机内,通过计算机分析和模拟,就能显示细胞样品的立体结构。激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态,也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的测量, 配合焦点稳定系统可以实现长时间活细胞动态观察。 10