文档介绍：(一)土壤取样 1 、土壤是天然培养基---- 其微生物数量、种类。 2 、土壤取样: (1 )取样的位置:土壤中 70～ 90 %是细菌。在富含有机质的土壤层的 3～ 8cm 处中分布着绝大多数的细菌。(2 )取样要求:铲去表层土。(1) 、测细菌数:一般用 10 4、 10 5、 10 6 稀释液。(二) 样品稀释(2)、测放线菌: 一般用 10 3、 10 4、 10 5 稀释液。原则: 确保平板上的菌落数在之间。(3) 、测真菌数:一般用 10 2、 10 3、 10 4 稀释液。 1 、接种:用适当的稀释液作涂布平板 2 、培养:细菌: 30～ 37℃,1～ 2d; (三)微生物的培养与观察放线菌: 25～ 28℃,5～ 7d; 霉菌: 25～ 28℃,3～ 4d。 3 、观察: 24h 统计一次菌落数目。原因: 不同种类的微生物,往往需不同的培养温度和培养时间,每隔 24h 统计 1 次菌落数目,选取菌落数目稳定时记录作为结果,这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 “稳定菌落”为观察对象。原因: 不同种类的细菌形成的菌落, 在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一度的特征,菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。(四)鉴定酚红鉴别培养基:鉴定分解尿素的细菌。原理:脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→结论:该细菌能分解尿素。注意: 1 、在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间) ,同种微生物表现出相同而稳定的菌落特征。 2 、关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等,都是区分细菌的重要手段。五、实验的具体操作(一) 、无菌操作 1 、土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土 3cm 左右,再取样,将样品装入事先准备好的信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 2 、制备培养基:制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。 3 、样品的稀释: (1) 、应在火焰旁称取土壤 10g 。将称好的土样倒入盛有 90mL 无菌水的锥形瓶中,塞好棉塞。(2) 、在稀释土壤溶液的过程中,每一步都要在火焰旁进行。注意①①、、为了保证结果准确为了保证结果准确, , 一般选择菌落数在一般选择菌落数在 30 30———— 300 300 的平板上进行计数。的平板上进行计数。②②、为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三、为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中个或三个以上的平皿中, , 经涂布经涂布, , 培养计算出菌落平培养计算出菌落平均数。均数。③③、统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是、统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为两个或多个细胞连在一起时因为两个或多个细胞连在一起时, , 平板上观察到的只平板上观察到的只是一个菌落是一个菌落。。因此因此, , 统计结果一般用菌落数而不是活统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。菌数来表示。④④、涂布平板法所选、涂布平板法所选择倒平板的稀释度很重要, 择倒平板的稀释度很重要, 一般以三个稀释度中的第二个稀释度倒平板所出现一般以三个稀释度中的第二个稀释度倒平板所出现的平均菌落数在的平均菌落数在 50 50 个左右为最好。个左右为最好。例8: 在涂布平板操作时错误的是() A .将涂布器在酒精灯火焰上灼烧,直到烧红 B .