文档介绍：动物生物化学实验
实验三血清蛋白含量测定
一、实验目的
学****光谱光度法测定物质含量的原理
掌握考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质
含量的基本原理和技术
二、实验原理
1. 光谱光度技术原理
利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征，以此来确定物质性质、结构或含量。
光谱分析技术分类：
发射光谱分析技术：火焰光度法、原子发射光谱法和
荧光光谱法
吸收光谱分析技术：紫外、可见光分光光度法，原子
吸收分光光度法和红外光谱法
散射光谱分析技术：比浊法
吸光度与透光度
A = -lgT = -lgI/I0 = lgI0/I
当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部份光被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透光度，即：
T = I/I0
T×100为T%称为百分透光度。透光度的负对数称为吸光度即：
Lambert-Beer定律

Lambert指出：当一定的光线（I0）通过呈色溶液时，如果溶液的浓度（C）是一定的，则透过光线的强度（I）随通过液层的厚度（L）的增加成指数函数的减少，即
I=I0×10-KL
Beer指出：当液层厚度（L）一定时，透过光线的强度随吸收光线物质浓度（C）增加而成指数函数的减少，即：
I=I0×10-KC
I0
I
合并上两式：
I=I0×10-KCL
取对数： -lgI/I0 = KCL
A(OD) = -lgT = -lgI/I0 = lgI0/I = KLC
式中A为吸光度或光密度（optical density),也可用OD表示；K为比例常数，称为吸光系数；L为溶液层厚度，称为光径；C为溶液浓度
故Lambert-Beer定律可表述为：当一单色光透过呈色溶液时，光密度或消光度与被测溶液的浓度，液层的厚度成正比；透光度的对数与其成反比。
A(OD) = -lgT = -lgI/I0 = lgI0/I = KLC
据Lambert-Beer定律，当液层厚度单位为cm，浓度单位为mol/L时，吸光系数K称为摩尔吸光系数(ε)。
ε的意义是：当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时，在特定波长下的吸光度值。ε是物质的特征性常数。

A(OD) = εLC

直接计算法： A(OD) =εLC
C = A/εL
标准管法：对同一物质，在特定测定条件下，
ε是相同的常数
A(OD)标 = εLC标
A(OD)未 = εLC未
C未= [A(OD)未 / A(OD)]标 × C标