文档介绍：摘要精氨酸对乳腺上皮细胞中酪蛋白合成的影响及其调控机制镏荽笱Ф锟蒲в爰际跹г海该研究以体外培养的中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞J匝槟P停芯颗嘌中不同水平精氨酸匀橄偕掀は赴欣业鞍缀铣傻挠跋欤诖嘶∩希徊窖子机制,以为提高牛奶中乳蛋白含量、改善牛奶质量提供理论依据。研究包括四个部分:试验一奶牛乳腺上皮细胞的体外培养进行形态学、生长特性、免疫组织化学、生物学功能的鉴定。利用台盼蓝计数法绘制细胞生长曲线,采用免疫组化法对上皮细胞特异性蛋白一的表达进行鉴定,采用—、基因在细胞内均能有效的表达,说明分离得到的细胞具有乳腺上皮细胞的特试验二精氢酸对乳腺上皮细胞内酪蛋白合成的影响该试验以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为试验模型,研究培养基中不同水平的研究生:徐柏林导师:王洪荣教授究跋炖业鞍缀铣傻幕疲直鸫酉赴鲋乘剑槔业鞍谆颉⒗业鞍缀铣尚藕转导相关基因转录水平等方面来进行初步探讨。旨在得出跋烊槔业鞍缀铣傻一般规律,筛选出酪蛋白最大合成量时呐ǘ龋唤沂続影响酪蛋白合成的细胞分该试验以健康的中国荷斯坦奶牛的泌乳期乳腺组织为试验材料,采用胶原酶消化法在体外培养得到奶牛乳腺上皮细胞,根据成纤维细胞和乳腺上皮对胰蛋白酶的敏感性不同进行奶牛乳腺上皮细胞的纯化,对分离纯化的细胞进行传代、冻存与复苏。并对得到的细胞术对乳腺上皮细胞内编码酪蛋白合成的基因、、、的表达进行检测。结果显示:分离得到的细胞呈鹅路石样,细胞之间连接紧密且界限清晰,单层生长;细胞生长曲线呈危哂忻飨缘那狈凇⒅甘て凇⑵教ㄆ冢赴诘谌旖胫数生长期于第七天进入平台期,符合一般的细胞生长规律;一的免疫组化鉴定结果呈现出强阳性,说明分离得到的细胞属典型的上皮细胞;—峁允荆珻异性生物功能。对奶牛乳腺上皮细胞内焕业鞍缀铣傻挠跋臁J匝椴捎玫ヒ蛩水平完全随机试验设计,以无呐嘌碅蹲/为对照,蹲./、倍组./、蹲/、;对于焕业鞍祝薃蹲椋鞲龃碜橛攵哉兆橄啾炔钜牛乳腺上皮细胞生长以及细胞增殖活性的影响。试验设计同试验二。采用台盼蓝计数法绘制不同处理组的细胞生长曲线,采用噻唑蓝ǚ直鸺觳飧鞲龃碜榈南赴鲋郴钚浴=峁允荆鞲龃碜榈南赴で呔蔛形,在第三天达到/蹲橐倍组贝僭鲋承Ч霞选试验四精氨酸对乳腺上皮细胞内酪蛋白合成以及信号转导相关基因表达的影响表达的影响。试验设计同试验二。以D诓危捎肦表达量。结果显示:对于、、基因,除了蹲橛階蹲橥猓渌鞲鞔碜橛攵哉兆橄啾认灾碌髌浔泶;从而促进乳蛋白基因的表达,当体外细胞培养液中ǘ任/、蹲./为试验处理组,采用ǹ辜行姆ǘ愿鞲鲎榈南赴内一酪蛋白合成量进行测定。结果显示:对于焕业鞍祝薃蹲橛蹲椋鞔碜橛攵哉兆橄啾炔钜煜灾,。试验三精氨酸对乳腺上皮细胞生长及增殖的影响该试验以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,研究培养基中不同水平的阅指数期,第七天进入平台期,进入平台期后蹲榈南赴扛哂谄渌髯椋籑结果显示,保珹蹲橛攵哉兆橄啾染钜煜灾;时,髯橛攵哉兆橄啾染钜煜灾。说明精氨酸能促进乳腺上皮细胞的增殖,且在ǘ任牛乳腺上皮细胞内编码乳酪蛋白合成的基因、、、以及与乳蛋白合成有关的/藕磐飞舷喙鼗騄、、的际跫觳飧鞲处理组的、、、、、、虻南喽蹲外,、基因,除了蹲橥猓鞔碜橛攵哉兆橄啾认灾系髌浔泶,对于颍倍组外,,除了在蹲槭保珻、、.=峁得鳎珹对编码乳蛋白合成基因、、、的表达起着重要的促进作用,适宜浓度的芄淮俳膛H橄偕掀は赴、、、基因的表达,且当体外细胞培养液中ǘ任/时,这四种酪蛋白基因的表达显著上调;芄患せ钕赴诘腏疭、通路/保琂、、虻谋泶锞系鳎基因表达显著下调。—甌关键词:精氨酸;奶牛乳腺上皮细胞;酪蛋白合成;调控机制·:.,琲琣瑂.,、、.:甌瑀甌甈一.—猯琧畉“痵猵,././,./,./.籌..甉.、.....瓹,甊珻,,甌瓵琣:甤甇甌瑀甌盨”瓵甌,...甌.,..琲篈籧,,,,,,,,,,,//甌,琺琒籧籧籫;目录第一章文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯研究的目的和意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯国内外研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.ò⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.精氨酸可调控细