文档介绍：中山大学
博士学位论文
斜带石斑鱼生长抑制激素受体的克隆、表达和功能研究
姓名:董海燕
申请学位级别:博士
专业:海洋生物学
指导教师:林浩然
20100604
论文题目:斜带石斑鱼生长抑制激素受体的克隆、表达与功能研究摘要含有。琋.,璍.⋯琖⋯璓,甈。.蚇甆保守序列。四个受专业:博士生:导师:协助指导老师:海洋生物学董海燕林浩然李文笙生长抑制激素虺芐形姆胍布虺粕ひ炙和其受体,简称歉龆嗷蚣易濉Iひ炙厥芴迨瞧叽慰缒な芴澹诩棺刀锏纳ぃ发育和代谢中有着重要作用。本研究首从斜带石斑鱼中分别克隆了,的全长序列。运用和检测了斜带石斑鱼谋泶锴榭龊笱∪∫恍有代表的组织、胚胎、仔鱼不同发育阶段,再采用际醣冉戏治隽诵贝鱼/在成鱼各组织,胚胎、仔鱼不同发育阶段的表达分布。在体内外研究了对斜带石斑鱼垂体ぜに释放以及珿,生长激素受体虶的影响。随后利用斜带石斑鱼垂体细胞原代培养系统,。在细胞中,利用荧光素酶报告基因分析了榈嫉腸B蓟钚裕詈罄糜ü獗昙茄芯苛耸芴宓哪ざㄎ弧主要研究结果如下:狙芯靠寺〉男贝哂鉙,和娜ǔ蛄谐ざ确直鸱直鸨嗦和。斜带石斑鱼的,与其它脊椎动物峁估嗨啤K母鍪芴结构上都包括饲颍吒隹缒で颍霭饣罚母霭诨泛虲端区域。在饲域有糖基化位点,吻蚝桶诨非蛴卸喔隽姿峄坏恪F吒隹缒つ诿扛隹缒で戏直体的第一和第二个包外环的相似位置上分别有一个保守的半胱氨酸。此外,在牡中山大学博士论文年
受体有两个大的进化支:一支是硪恢荢/。诮讨薪衔1基因组序列中都含与哺乳类嗨菩蛄小5痹诮髦屑尤胝庑┩ü蜃橥撇饫吹脑,脊髓和垂体以及外周组织肝脏,胃,肠,胸腺,视网膜,卵巢共个组织的表达特性。和端脑,然后是中枢神经系统的其他组织和外周组织。端发现了一段由个连续的丝氨酸“弊槌傻男蛄小与其它脊椎动物氨基酸序列同源性分析和进化树分析发现,斜带石斑鱼四个生长抑素守,而和蟹制缃洗蟆P贝哂鉙,和鸵阎5钠渌棺刀的相应受体分别展现了.%,..ィ%和..サ陌被嵝蛄幸致性。但斜带石斑鱼四种受体间仅有.%的序列一致性。同源性分析表明斜带石斑鱼谕焕嘈偷氖芴寮涞耐葱砸1炔煌芴謇嘈图涞耐葱愿摺4送猓://,我们发现在斑马鱼,棘鱼,河豚和蛙的编码蛋白后,鱼类和哺乳类一样都包括和/礁龃蟮慕В丫道的虹鳟的和及斑马鱼的都与已知的哺乳类和鸟类的为一类。ü齊岷蟂对谋泶镅芯勘砻鳎贝哂鉙在中枢神经系统,垂体,卵巢,胃,肠,胸腺,视网膜和肝脏都有表达。在胚胎和幼鱼发育阶段斜带石斑鱼,在未受精的卵中有表达,但受精后母体携带的表达消失,原肠期开始表达,出膜时达到较高水平,此后的所有仔鱼期都有表达。利用定量的方法比较分析了斜带石斑鱼四种谥惺嗌窬低车那澳裕心裕除了在胃肠没有检测到Ⅱ匕和在视网膜没检测到猓渌橹兴闹质芴宓谋达。总的来说,谥惺嗌窬低潮泶锪恳8哂谕庵茏橹6四灾蠸的表达量最高,其他组织表达量相对较低。在垂体中表达量最高,其次是肝脏也是在垂体中表达量最高,在前脑,肝脏,胃中的量也很丰富。水平除垂体外其他组织均很低。在斜带石斑鱼雠咛シ⒂逼诤个仔鱼时期四种的表达变化很大。在所有选择的时期都有表达,在囊胚和原肠胚期没有检测到匕的表达,在囊胚期没有检测到的表达。在胚胎阶段,蚐水平在孵化阶段达到高峰,持续下降直到仔鱼孵出后第五天,表达量再次出现增加是在仔鱼孵出后第十五天,到了第天到达第二个峰值,而却保持一个较低水平。中山大学博士论文董海燕年
水平逐渐升高而局軦则保持一个很低的水平。时构建了分别带有红色和绿色荧光标签的蚐表达载体,转染细胞证实关键词:斜带石斑鱼,生长抑素,生长抑素受体,克隆,表达调节,荧光素酶报告基因和的峰值出现在胚胎发育的脑泡形成期。在仔鱼孵化期和胚体形成期表达量也较高。孵化后蚐水平都快速下降,随后从仔鱼孵出后第斓降欤琒谔逋猓琒蚐茉诟吲ǘ仁币种菩贝哂愦固逑赴鸊头牛玈在低浓度时促进释放。处理螅琒,水平比对照组显著升高,并依赖浓度,但对琒,和却没有影响。处理螅琒,水平比对照组显著升高,并依赖浓度,但对珿虶疵挥影响。表达则随着和浓度的增高而而显著地降低,同样依赖于浓度。在体内,斜带石斑鱼腹腔注射后,垂体,以及肝脏的蚐的水平比对照组显著升高,而肝脏和的水平比对照组显著降低,并都依赖浓度。但垂体的,及肝脏的琒的水平与对照组比较并没有显著差异。在斜带石斑鱼原代培养的垂体细胞中,我们利用处理前后虴磷酸化水平的变化证实能够激活虴通路,然后利用返囊种萍罜虴通路的抑制剂硐赴治鯟蚒对抑制的及刺激的表达的抑制作用,分析垂体榈嫉南掠涡藕拧谒彩弊H玖诵贝哂愕腟,,泶镌靥宓腍赴校攵哉兆橄啾显著地抑刺激的荧光素酶报告基因的表达,抑制效果依赖的浓度,但不影响其本底表达水平。共转染了蚐的处理组要比单独转染等量的騍的表达载体的细胞中对碳さ挠ü馑孛副ǜ婊虻谋泶锏囊种谱饔们壳掖嬖谙灾钜臁M两种