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文档介绍

文档介绍:第一军医大学
硕士学位论文
供体凋亡细胞输注诱导胰岛移植免疫耐受的研究
姓名:韩钧凌
申请学位级别:硕士
专业:内分泌与代谢
指导教师:蔡德鸿
20050606
供体凋亡细胞输注诱导胰岛移植免疫耐受的研究硕士研究生:韩钧凌指导教师:蔡德鸿教授摘要研究背景:胰岛移植作为一种潜在的可彻底治愈糖尿病的治疗方法,长期以来倍受瞩目,尤其年方案的成功,为用胰岛移植的方法治愈型糖尿病开拓了广泛的应用前景。但是,该方案仍需应用免疫抑制剂来抑制移植免疫排斥的发生,长期应用免疫抑制剂必然会给移植病人带来许多副作用和潜在的危险性,如增加感染、肿瘤的发生率,有的免疫抑制剂本身对胰岛细胞有毒性,可引起移植后的糖尿病。诱导胰岛移植免疫耐受则可以避免长期服用免疫抑制剂的毒副作用,有希望成为促进移植后胰岛长期存活的一种有效手段。近年来一些研究表明凋亡细胞能够主动调节机体的免疫功能,并能通过调节机体细胞免疫和体液免疫的途径诱导免疫耐受。凋亡细胞可以抑制的成熟,而不成熟在向赴崂锟乖辈荒芴峁┏浞值墓泊碳ば藕牛佣盏济庖吣受,另外,吞噬细胞在吞噬凋亡细胞的同时分泌抑制性淋巴因子,亦可诱导免疫耐受。因此,我们拟通过凋亡细胞诱导胰岛移植免疫耐受,探求延长移植胰岛存活的方法。目的:本实验旨在探讨供者凋亡细胞预输注能否抑制受者对供者胰岛移植物的排斥反应,延长胰岛移植物的存活时间,为寻找诱导胰岛移植免疫耐受的新方法提供实验依据。方法:⒐趸舛蕴逋馀嘌似⑾赴挠跋欤翰捎醚心シɑ竦眯〉娜似⑾赴将细胞分组后给予相应的生理盐水或不同浓度的。处理,运用四唑盐色法检测线粒体功能,将细胞与狥疨旌戏跤笫褂昧魇较赴仪检测早期凋亡细胞.;⑷艘鹊合赴姆掷氪炕豪冒胱远鹊悍掷胱爸孟认伲一不连续密度梯度法纯化胰岛细胞;硕士学位论丈
⒔⑻悄虿《锬P停阂許/体重骨蛔⑸洌辗⑸⒐┨宓蛲鱿赴渥⒍怨┦芴寤旌狭馨拖赴嘌挠跋欤航悄虿縄护.±.%,胰岛素释放试验反应良好,高糖时胰岛素的释放量为低糖时的小鼠实验性糖尿病次血糖≥/;鼠随机分组,分别进行鹤⑸洹⒄9┨逑赴な渥ⅰ⒐┨宓蛲鱿赴输注、供体坏死细胞预输注,各组在预处理旌笕〕銎⒃喾掷肓馨拖赴供体淋巴细胞进行混合培养,ü鄄焓芴辶馨拖赴鲋撤从Γ⒐┨宓蛲鱿赴渥⒍砸鹊阂浦参锏挠跋欤航悄虿小鼠随机分组为鹤⑸渥椤⒄9┨逑赴な渥ⅰ⒐┨宓蛲鱿赴な渥⒓肮┨寤邓老赴输注组,各组在预处理旌笮幸鹊阂浦玻的胰岛细胞移植入各组糖尿病小鼠的肾包囊内,比较各组移植物生存时间上的差异;⒔ú煌榧安煌逼诘囊浦参锶〕鲎鲆鹊核氐拿庖咦榛觳狻结果:⑷似⑾赴吡L骞δ芗暗蛲雎视際。呈剂量一效应关系,随着ǘ的增高,线粒体功能逐渐降低,而凋亡率则随Eǘ鹊脑龈叨黾樱彼与捍硎奔湟泊嬖谑奔湟恍вΦ墓叵怠8鞔碜榧湎赴蛲雎蚀嬖谙灾钜/淼南赴橛锏降蛲龈叻.±⒋炕笃骄刻跞艘认倏苫袢∫,纯度为叮⒁許/体重骨蛔⑷氲姆椒ǎ沙晒τ辗小鼠的试验性糖尿病,糖尿病模型成功率为%;⒌ハ蚧旌狭馨拖赴嘌螅朐な渥液、供体正常细胞及供体坏死细胞的受体鼠淋巴细胞比较,预输注供体凋亡细胞的受体鼠淋巴细胞对供体淋巴细胞刺激的增殖反应明显减弱,其刺激指数为.,其它三组分别⒃な渥⒐┱⑹渥⒐┱哒O赴蚧邓老赴橐鹊阂浦参锎婊钍奔浞直欤⑹渥液组、输注供者正常细胞或坏死细胞组在移植物被排斥后取出做组织切片,庖咦榛旧ḿ觳庵な滴抟鹊核匮粜韵赴嬖凇5蛲鱿胞预输注组移植组移植物在移植受体血糖正常时取出作庖咦橹供体凋亡细胞输注诱导胰岛移植免疫耐受的研究以:%:为.、繭.、甶;为±、、±Ⅱ
染色证实有表达胰岛素阳性的胰岛细胞团存在,呈棕褐色,而在移植物被排斥后取出行免疫组化检测无胰岛素阳性的胰岛细胞团存在。结论:供者凋亡细胞输注能延长胰岛移植物存活时间,抑制免疫排斥反应,利用凋亡细胞诱导胰岛移植免疫耐受是一条可行的途径。硕士学位论文关键词:凋亡细胞免疫耐受胰岛移植糖尿病
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年大鼠的胸腺,联用抗受体淋巴细胞血清,移植胰岛获得长期存活,并诱导出糖尿病目前已经成为继心血管疾病、肿瘤之后的第三大疾病,其导致的各种慢性并发症已成为患者健康与生命最主要的威胁。尽管目前在糖尿病的治疗措施中如口服降糖药或外源性胰岛素治疗方面都己取得长足进展,但未取得重大突破。而胰岛移植作为一种潜在的可彻底治愈糖尿病的治疗方法,长期以来倍受瞩目。年等报道应用三联免疫方案对齦型糖尿病患者行胰岛移