文档介绍：中国医科大学
博士学位论文
正常及先天性肛门直肠畸形大鼠及人类肠神经系统发育及调控
的对比研究
姓名:贾慧敏
申请学位级别:博士
专业:儿科学
指导教师:王维林
20090401
胚胎发育来源于迷走神经嵴及骶神经嵴细胞,循肠管头尾方向发育增殖。删正常及先天性肛门直肠畸形大鼠及人类肠神经系统发育及调控的对比研究门直肠畸形动物实验研究发现,、,妒等多种基因在消化道末·中文论著摘要·刖进,但中、高位Ⅵ氖鹾蟪て谒娣孟允荆杂行矶嗷颊叽嬖诓煌潭鹊呐疟恪控便功能障碍。术后肛门直肠功能障碍是盆底神经肌肉发育不良所致,而肠道动力无疑是影响直肠肛管控便屏障最重要的因素之一,研究肠神经系统、肠道肌肉及神经肌肉联系的发育及其可能的调控机制已经很有必要。既往研究显示,在中、高位肛门直肠畸形患者中,其骶髓中枢及直肠末端的神经系统有不同程度的改变,但迄今为止,对其胚胎发育过程和详细的病理改变胚胎学的研究进展已初步阐明肠神经系统胚胎学发生的机制。肠神经系统的在畸形发生后,是否伴随着神经嵴细胞迁移异常昵只蛭Gㄒ浦脸Ρ诤蠓⒂异位等畸形。在鰏发生后,这些信号分子是否仍然继续在肠道发育中发挥重罱先天性肛门直肠畸形琣是<南阑形,是世界卫生组织常规监测的先天畸形之一,占消化道畸形的,发病率为/。尽管长期以来人们对肛门直肠畸形的手术方式进行着不断的改尚不清楚。殖异常呢庑┒际巧形唇饩龅奈侍狻O忍煨愿孛胖背蔚牟∫蛑两袢圆幻髁恕目前认为,肛门直肠畸形的发生是遗传因素和环境因素共同作用的结果。流行病学和动物实验表明遗传因素在其发病过程中发挥重要作用。最近国外学者利用肛端发育中发挥重要作用。当上述基因异常均可导致动物出现肛门闭锁、肛门开口要作用并且在胚胎发育过程中的表达是否存在异常呢在上述众多的信号分子中,高度保守的藕诺鞍准易逶谂咛シ⒂蟹⒒着尤其重要的作用,已经引起了许多学者的注意。鞍淄ü煌藕欧肿蛹
实验材料⑹笛槎铮⒉±瓯荆⑹笛槭约粒反应,其中对难芯空谥鸾ピ龆啵ǘ嗍巧婕叭颂甯鞲鱿低撤⑸某<肿瘤,对于其在调控肠道发育胚胎发育的研究刚刚起步,尤其对于肠神经肌肉发育调控的机制目前尚不清楚。型,利用神经元、突触囊泡蛋白及氮能神经元的发育作为评价肠神经系统及肠道,.、突触素,<癆笫蠼岢Φ谋泶锛氨浠胎期发育的可能调控机制。另外,我们采用患儿的直肠末端组织对的表达进行了进一步验证,以期得到一些更为有益的研究启示。患儿直肠末端标本例:男例,、公司虎勖庖咦榛刑超敏试剂盒鹤愿V萋跣律锛际蹩7⒂邢薰;二步法山羊免疫组化检测试剂盒鹤员本┲猩冀鹎殴;④乙烯硫脲鹤缘鹿鶶.;⑤逆转录试剂盒鹤源罅ι锕こ有限公司虎拮艿鞍壮樘崾约梁购自赛驰公司的相互作用,触发了调节细胞生长、迁移、分化及发育等多方面的复杂信号级联本文应用乙烯硫脲珽禄腤笫蟮腁锬神经肌肉发育的标志物,应用相应的抗体即蛋白基因产物琋鄄焐鲜鲋副暝谂咛シ⒂讨械谋泶锛氨浠煌狈治鯳及况,探讨正常及大鼠与排便控制密切相关的肠神经系统及肠道平滑肌的胚体重说腤蟀资螅芍泄娇拼笱Ц绞羰⒕┮皆憾锊刻峁高位畸形形换例,低位畸形例死于非胃肠道疾病患儿的直肠末端标本为对照组:男例,平均年龄个月。和多克隆抗体鹤悦拦鶶
⒄S肷緎的直肠内呐咛シ⒂碳氨冉在同张切片中观察,同期的中肠肠壁的神经发育较后肠明显成熟。而在删椋实验方法结果片,分别进行如下实验:、癗免疫组化/荧光染色,以其作为胚胎期⒂谋曛疚铮鄄煺:虯笫驟的胚胎发育过程;②进行、的免疫组化染色来大体比较上述因子在直肠壁内的表的实验,其余部分标本进行.、标记的神经元的在直肠内的迁移发育情况:通过免疫组化结果显示,在成熟健康孕鼠妊娠第天/经胃管给予孕鼠灌入浓度为ィ陨硌嗡鋈芗,制作大鼠动物模型;对照组给予等量的生理盐水。分别在大鼠瓻时剖宫取胎,部分取完整胚胎或胚胎盆部,经ザ嗑奂兹┝姿嵫位撼逡汗潭ā⑼阉笾瞥衫椋惺缸疵妗⒑岫厦娴牧达情况。另一部分鼠胚通过显微镜下取材获得末端直肠标本,,築悍治鱿低撑恼眨琄治鋈砑邪攵量分析。所有数据均以;表示,。人类正常及直肠末端标本进行拿庖咦榛癢实验,对其表达进行定位和定量,并比较分析。正常对照组,保荷窬障赴丫ㄖ灿谡龊蟪Γ背Ρ谀诳杉⒃谘粜韵胞,这时环肌层刚刚开始分化;从紼琍阳性细胞出现在环肌浆膜侧即肌间神经丛部位,成散在单个出现,钡闹背δ┒说淖菁∠宋植既然稀疏,,,呈团簇状,粘膜下也可见阳性细胞,旄C飨浴6鄙窬障赴诨巫橹背χ幸部上允荆胝W槎ㄎ晃廾飨圆钜欤直肠尿道瘘管周围未见阳性细胞;蠼背γざ舜θ钥杉粜韵赴ǚ布与正常组相比,阳性细胞