文档介绍：⑧洳≥:⑹博士学位论文中文论文题目:合作导师:分类号:密单位代码学号级:
,
⑧⋯论文作者签名:指导教师签名:金麽生硒究虽郭蕉彪婴究虽昙敖厶熬援答辩期:..
⑧’■■■■■●■■■■瘛觥馹瘛馹————————————一!!!!!!!觥觥瘛觥鯻一一■‘
刷磴辄翎山⋯⋯躲翰省学位做作者签名::力斫/年占月,口日研究成果,也不包含为获得逝姿盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。盘望盘堂论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权逝垄盘堂可以将学位论文签字日期:歹斫拢痮日本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文作者完全了解有权保留并向国家有关部门或机构送交本的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ
摘要中介体复合物是真核生物通用转录装置的重要组成部分,转录因子在中介体的协助下与启动子结合,从而调控基因的转录。迄今为止,对酵母中介体的结构和功能已研究得比较清楚,对哺乳动物和人中介体的研究也比较深入,但对植物中介体的研究还相对滞后。虽然中介体在酵母和多细胞动物以及植物的细胞中具有很高的结构和功能保守性,但不同物种间仍存在很大的差异。这种差异在一定程度上保持了物种遗传的稳定性与物种变化的多样性,也是物种进化的结果。中介体亚基功能的缺失导致酵母温敏性致死,也导致拟南芥叶片数增多、开花延迟等。这说明具有十分重要的功能。在酵母和人类细胞中,的分子机理已研究得比较清楚,但在植物中还知之甚少。因此,研究植物中的分子机理十分必要,这不但有助于理解中介体复合物亚基在真核生物基因的转录调控中的作用,而且能够为作物遗传改良提供理论依据。本研究克隆了烟草和水稻的基因直鹈狽蚈,通过扇藕凸勘泶锏确椒ㄑ芯苛薓谘滩莺退局械墓δ埽和ü縋或启动子驱动的虮泶铮治隽薓谘滩莺退局械氖笨毡泶模式;通过构建荧光蛋白的融合表达载体,研究了蛋白的亚细胞定位;通过技术分析了与其它中介体亚基的相互作用。主要研究结果如下:甆虻目寺∮牍δ苎芯利用同源搜索,获得与拟南芥同源的烟草蛄校苑淹椿因为参照序列设计引物,克隆了普通烟草基因。测序确定编码序列长,编码霭被帷M此阉鞅榷苑⑾郑琈谥参镏懈叨缺J兀分别含有酵母与嗨菩蛄小6縋检测野生型烟草,发现在烟草营养器官的幼嫩组织和生殖器官里表达较强。构建了载体并转化烟草。结果表明,植株出现诸多异常:叶片数显著增加,部分叶片畸形;长日早花、短日晚花;雄性不育,花粉变大,;叶片表皮细胞、叶肉细胞、叶绿体皆变大,气孔密度下降,花器官变大,等等。滩莺退炯父鲋薪樘逖腔难窍赴ㄎ缓捅泶锲追治利用同源搜索和蛄衅唇樱寺×搜滩葜薪樘逖腔騈、和菇启动子驱动的与增强型绿色荧光蛋白和增强型黄色荧光蛋白基因的融合表达载体,利用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表浙江火学博士学位论文摘要
融合表达载体蚿约昂蠩Ⅵ达进行亚细胞定位分析。结果表明,、蚇定位在细胞核和细胞质内,但主要在细胞核里。同源克隆了水稻中介体亚基基因、和菇擞衩譽启动子驱动的基因的融合表达载体,转化烟草叶片进行亚细胞定位分析。结果表明,特异地定位在细胞核内;定位在细胞核与细胞质内,但主要在细胞核内;特异地在细胞壁处成段分布,其亚细胞定位有待于进一步确认。同时,利用现有的基因芯片数据,对水稻个推测的中介体亚基基因在中组织中的表达谱进行了聚类分析。结果表明,个中介体亚基中,谋泶镒橹匾煨宰钋浚其次为渌鲅腔虮泶镂廾飨怨媛桑辖咏槌尚捅泶铩诩觳獾母鞲鲎橹除了受精后斓呐呷都有较强表达,在个组织中整体表达较弱。、、蚈前鲎橹殖组的过程中起关键作用的龌颉甆肫渌腔幕プ鞣治为了证实同源克隆的属于烟草中介体亚基,同时研究与其它亚基的相互作用,┑.被岜嗦胄蛄斜签的融合表达载体蚿0袾、和的全长强寺〉较嘤Φ脑靥迳希竦肗端和朔直鸷胁煌珽蔚融合表达载体,转化农杆菌后,把不同的菌液混合,共转化烟草叶片,在共聚焦显微镜下观察荧光。结果表明,与嬖诨プ鳎虢湍钢介体亚基的互作关系一致。同时,还观察到与和幕作以及隢幕プ鳌甇δ艿某醪窖芯为了研究在水稻中的时空表达与功能,构建了启动子驱动的泶镌靥逡约癘墓勘泶镌靥搴蚏靥澹耘└司榈挤ㄗ;水稻品种中花。结果表明,在各个组织都能检测到虻谋泶铮饕T谟养生长和生殖生长较旺盛的部位染色较强,包括侧根原基、子房和雌蕊基部、初分化的