文档介绍：专名神经外科学申请人李业海指教师姜晓丹教授答辩委员会主席答辩委员会成员称学位导陈善成教授陆永建教授梁军潮教授张旺明教授汪求精教授论文评阅人硫酸软骨素酶蕴逋饨褐蜀:勰P椭瘟谱饔玫某醪绞笛檠芯业南方医科大学级硕士学位论文课题来源:广东省及广州市科技计划项卧粤财教量苹痭/—凰肟萍继踝瓻...:
硫酸软骨素酶蕴逋饨褐蜀:勰P椭疗作用的初步实验研究硕士研究生:李业海指导教师:姜晓丹教授摘要研究背景中枢神经系统,是人体神经系统的最主体部分,包括脑和脊髓,其主要功能是传递、储存和加工信息,产生各种心理活动,支配与控制人的全部行为。鹕撕螅捎诓”涞纳窬赴荒苡行У亟性生修复,而使其成为致死率、致残率高居榜首的疾病之一。因此,鹕说闹瘟是医学界的难点,也一直是国内外研究热点。鹕撕螅卸嘀忠种埔蛩刈璋酥嵬坏脑偕钪盏贾轮嵬辉偕О或局部仅形成有限的生长。在损伤点周围形成胶质瘢痕,是运鹕说囊桓重要的反应,并成为抑制轴突再生的一个重要抑制因素。瘢痕组织是由活化的星形胶细胞、少突胶质细胞前体细胞、激活的小胶质细胞/巨噬细胞、脑膜成纤维细胞和血管内皮细胞等组成;在胶质瘢痕中包含了多种抑制轴突再生的抑制性分子,其中最重要的一种抑制分子是硫酸软骨素蛋白多糖珻S醒芯咳衔#贑损伤后,有多种类型的表达迅速提高,其不利于损伤的修复,导致神经轴突再生失败。还有研究表明,⒒右种浦嵬辉偕慕峁故瞧浒被暇厶遣嗔矗ü蛩崛砉撬孛窤消化其侧链,具有减轻抑制轴突再生的能力。在用于治疗鹕说奶迥谘芯恐校⑾至薈具有使部分神经纤维再生、提高神经的塑性和促进神经恢复的作用。但是到目前为止,娜ソ褐蜀
第—、,其发挥作用的最佳条件亦无统一答案。为了从去胶质瘢痕的角度促鹕撕蟮纳窬偕狙芯客ü貌煌度的蕴逋饨褐蜀:勰P椭瘟谱饔玫某醪教教郑:笮钊胙芯吭谔芩鸷蟮纳窬偕峁┤ソ褐蜀:鄯矫娴那捌诠ぷ骰目的:获取、传代培养及初步鉴定大鼠皮层星形胶质细胞和脑膜成纤维细胞,为下一步建立体外胶质瘢痕模型及其治疗研究奠定基础。方法:切谓褐氏赴脑嘌⒋炕⒋ù俺墒旎嘌混合胶质细胞原代培养:取新生天大鼠唬ゾ凭ń泡分钟,断头处死,完整取下大脑,瓾液冲洗椋环掷氪竽云げ悖用显微镊仔细剥离脑膜和血管,再以瓾液冲洗椋恢们嗝顾匦∑恐屑成笮〉%胎牛血清的/嘌混匀终止消化:用火焰抛光的玻璃吸管轻轻吹打,直至无明显组织块;胄分钟,弃上清;用含%胎牛血清的/嘌匦剖钕赴髡赴ǘ戎个/,接种至含有%胎牛血清/耆嘌培养瓶中,置℃、培养箱培养,旌笕炕灰阂淮危コ老赴槠幻天半量换液一次,促混合胶质细胞充分生长,形成细胞分层。星形胶质细胞的纯化及传代:混合胶质细胞培养至第烊炕灰海天用完全培养基轻轻冲洗三遍,以去除漂浮的、贴壁疏松的细胞,加新鲜完全培养基,置培养箱平衡小时;然后取出培养瓶,旋紧瓶盖,固定在恒温摇床上。褚~个小时;然后取下培养瓶,于细胞培养问内以%酒精喷洒培养瓶表面消毒;于操作台上吸取原培养液轻轻吹打底层细胞三遍,再用新鲜培养基冲洗三遍,剩余的底层细胞主要为星形胶质中文摘要
细胞和极少数的少突胶质细胞;用ヒ让福瓻崆嵋《嘌浚细胞变圆后吸管轻轻吹打下贴壁细胞,收集细胞,胄模孪释耆嘌基重悬,按的比例传代,传代后神经元受损死亡,此时细胞的主体是星形胶质细胞,还有极少数的少突胶质细胞、小胶质细胞。由于星形胶质细胞分裂相对于少突胶质细胞迅速,少突胶质细胞的比例迅速下降,此时星形胶质细胞经抗免疫荧光鉴定,纯度可达%以上昙峁。星形胶质细胞的成熟化培养。体外长期培养笥周蟛糠值南胞增殖缓慢,成为高分化成熟星形胶质细胞,用法测定代星形胶质细胞的增殖活性,进行对比。阅こ上宋赴脑嘌按ù取新生天大鼠唬ゾ凭ń种樱贤反λ溃暾取下大脑,狧液冲洗椋环掷氪竽云げ悖孟晕⒛髯邢赴肽阅ぃê者收集于青霉素小瓶中,冷狧液冲洗三遍后,用眼科剪充分剪碎,并将剪碎的脑膜组织块接种至ザ嗑塾倚蛋彼—猯包被的淮涡耘嘌恐校雍ヌヅQG錎疐完全培养基、培养箱培养。每周换液危阅こ上宋赴ぶ寥合后,按传代培养,取代的脑膜成纤维细胞用于实验研究。粜韵赴始剖椒星形胶质细胞和脑膜成纤维细胞忻庖哂ü馊色,计算阳性细胞率。阳性细胞率计数方法:选取鲅荆扛鲅舅婊个不重叠视野×、粜缘南赴妥芟赴总细胞核数剖扑忝庖哂光染色阳性率,以辣曜疾睢北硎尽结果旌辖褐氏赴又螅蟛糠窒赴丫冢慌嘌天后,细胞长至%融合;培养至第欤赴植阈纬桑撞闵闲纬尚切谓褐氏赴ハ赴悖硕士学位论文,
第二部分胶质瘢痕体外模型的制作及鉴定中层为少突胶质细胞层;上层为小胶质细胞。纯化后的星形胶质细胞活力好,炜纱ù>璆庖哂ü饧ǎ琁图像分析检测,星形胶质细胞纯度为:阅ぷ橹榻又种罰包被的赴嘌亢螅琹谕耆冢天后,组织块变得扁平,边缘圆润,并有少许脑膜成纤维细胞从