文档介绍：第三军医大学
博士学位论文
HuR介导IL-1β增加NSCLC细胞VEGF-C mRNA稳定性的分子机制
姓名:王俊
申请学位级别:博士
专业:肿瘤学
指导教师:陈正堂
20080501
榈糏黾覰细胞—稳定性的分子机制摘要研究背景肿瘤扩散的重要机制之一是肿瘤细胞离丌原发部位,通过淋巴系统转移到淋巴结。近年研究证实,肿瘤诱导的淋巴管生成促进了癌细胞的转移性扩散,导致肿瘤患者预后差、生存率低。多项研究发现血管内皮生长因子一鸵籇是最重要的两个淋巴管生成因子,它们通过结合淋巴管内皮细胞系难9苣谄どひ蜃邮芴一继而促进鲋场⑶ㄒ坪凸茏唇峁剐纬桑佣盏剂馨凸苌伞大量临床病理研究证实,在多种人类肿瘤中,如非小细胞肺癌⑷橄侔结肠癌等实体肿瘤,—泶镉胛⒘馨凸苊芏⒘馨凸芮窒、淋巴结转移密切相关。多种化学诱导的肿瘤模型、、区域淋巴结转移甚至远处转移。因此,深入探讨—表达调控,以抑制—泶铮瓒狭馨凸苌桑钪崭纳贫裥灾琢龌颊叩脑ず螅有重要的理论意义和临床应用前景。与—嗨疲嘀盅字⑿藕藕头肿尤绲脱酢环氧化酶一⒋。然而,既往的研究多局限于核因子一狵等转录水平对—牡骺兀云湓谧B己笏平的调控尤其是在肿瘤细胞中的调控和机制尚不清楚。人抗原是胚胎致死视觉异常家族的岷系鞍祝畛醴⑾諬与神经分化有关。近年研究发现堑鹘趍榷ㄐ缘闹匾猂结合蛋白。研究证实,在细胞外信号的作用如炎症因子、激素和生长因子等刺激下,稍谙赴核和细胞浆之间穿梭,导致胞浆中的鞍琢吭龈撸⑼ü齊识别基序与多种宋捶肭疷母缓珹罨男虼鮅结合,使从胞核转运至胞浆的过程中保护免受核酸酶降解,从而增加的稳定性。多种分子的,如介导细胞增殖的细胞周期蛋白赴蜃覶一尽一虸,以及—虲一膍蠥,均受岷系鞍椎骺第二军医人学博十学位论文.
,包括增加稳定性的痛俳鴐到獾腁岷弦蜃右籌一。但欠褚驳骺亓薞狢表达,目前尚不清楚。体内外研究发现,唤鲈诙嘀秩死嘀琢鲎橹拖赴懈弑泶铮抑な蛋粜远皇前薍阳性与乳腺癌和直肠癌等预后相关。但目前尚未见敕癌关系的报告。最近研究发现,胞浆粜圆⒂肴橄侔〦跣浴跣院土馨徒转移密切相关。这些研究提示赡懿斡肓肆馨徒嶙R乒蹋ň咛寤粕胁磺宄目的研究隫狢表达在肺癌中的关系,并进一步探讨骺豓狢稳定性的分子机制,为寻找新的抗肿瘤淋巴管生成分子靶点提供实验依据。方法庖咦橹Хḿ觳釮和—鞍自齆组织和例肺良性病变组织中的表达,并分析肿瘤胞浆、胞核泶锓直鹩隫狢表达、肿瘤分期、分化程度及淋巴结转移等的关系。訪肺癌赴V饕L逋饽P停τ肳、定量和椒ḿ觳釯碳细胞表达—鞍缀蚼氖奔浜图亮啃应关系。梅畔呔谼脉冲追踪实验观察一上调—泶锸欠裼肫稳定性增加有关。菇℉干扰载体—ü齭干扰泶铮悦魅稨在—增加赴鸙狢稳定性中的作用。菇℉真核表达载体,体外分析高蕉訧碳细胞表达—挠跋臁甅实验和笛榉直鸱治鯤过表达对一诱导赴ず迁移的影响。肅/∈螅⒏弑泶颒和非高表达腖皮下移植瘤模型;分析高蕉砸浦擦錾ぁ狢表达、淋巴管生成、淋巴结转移和肺转移的影响。甒和定量分别检测高表达腖移植瘤、对照组移植瘤—鞍缀蚼谋泶锴榭觥妹庖哂ü夂凸簿劢瓜晕⒕倒鄄霫碳し蜗侔┫赴驢蛋白在胞核一胞浆的转运,并进一步分析通路在调控T酥械淖饔谩第三军医人学博士学位论文
.构建荧光素酶报告基因载体,通过双荧光报告基因检测试剂盒、分析含有腣狢疷在调控稳定性中的作用,并进一步分析不同区域调控稳定性的差异。结果齆的粜员泶锫省胞核阳性表达率、—粜员达率分别为./%和./敕瘟夹圆”渥橹冉暇有显著性差异。—⒛炅洹⒆橹Ю嘈秃妥橹只潭染幌喙。胞浆泶锼接肓馨徒嶙R、⒛炅浜头伟┳橹Ю嘈臀廾飨怨叵。。孀臝ǘ/黾樱琇细胞胞浆—鞍缀蚼约分泌的—较灾系鳎碳ず镒罡咧怠甀盏糣狢表达与—稳定性增加密切相关。晒菇藀猻干扰载体;载体转染赴碌髁薍表达,继而阻断了一诱导的—泶锊⒔档土薞狢稳定性。晒菇薍真核表达质粒狧;质粒转染赴黾恿薎诱导的—泶铩甌和笛榻峁允荆琀过表达增加了赴ㄒ疲俳讼锸笛榉治猵—/楹蚿—疞组。小鼠皮下移植冉蟨—对照组瑉嗑鄙稀⒍圆嗑鄙霞耙肝蚜馨徒嶙R坡饰7直鹞ァ%—榉直鹞%、.ズ%。—%±琻±哂型臣蒲Р钜。泶镒橐浦擦鯨±,显著高于对照组±。甒和定量结果显示泶锏腖移植瘤—白和水平显著高于对照组。庖哂ü夂凸簿劢瓜晕⒕导癢结果显示,—增加了鞍第三军医火学博宦畚胞生长。
在胞浆中的聚集。特异性抑制剂阻断了一邛诱导的艘话T和—泶铮⒔档土薞狢的稳定性和—泶铩