文档介绍：徐州医学院
硕士学位论文
RNA干扰技术沉默PTHrP基因影响软骨肉瘤细胞增殖和凋亡的研
究
姓名:韩会峰
申请学位级别:硕士
专业:骨外科
指导教师:秦宏敏
20080401
鐰缩略词表缩略词英文全称中文全称短发卡状扇逆转录一聚合酶链反应四甲基偶氮唑盐光密度免疫印迹徐州医学院硕士学位论文一一双链小干扰胎牛血清瓺Ⅵ毋簉
日期:监生么旦本论文《砌悄干扰技术沉默蛴跋烊砉侨饬鱿赴鲋澈偷蛲龅难芯俊论文使用授权声明论文独创性声明是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。本人完全了解徐州医学院有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送交论文的复印件和电子文档,允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名徐州医学院硕士学位论文作者签名:
如秒少论文审阅认定书在规定的学习年限内,按照研究生培养方案的要求,完成了研究生课程的学习,成绩合格;在我的指导下完成本学位论文,经审阅,论文中的观点、数据、表述和结构为我所认同,论文撰写格式符合学校的相关规定,同意将本论文作为学位申请论文送专家评审。徐州医学院硕士学位论文研究生导师签名:冢
扇偶际醭聊琍基因影响软骨肉瘤细胞增殖和凋亡的研究中文摘要构建针对目的基因谋泶镌靥錺芯科涠匀巳砉侨饬鱿赴鲋郴钚约捌湎喙匾蜃臃置诘挠跋欤猂干扰技术用于软骨肉瘤基因治疗提供理论基础。B寄0錎链的设计、合成按杓圃颍杓普攵訮基因蛄泻臛恢眉罨蛄械膕。再根据蛄猩杓谱艹ざ任膕转录模板⒎匆辶锤饕惶酢菇╯重组表达载体将等量的对应模板的蛄械恼⒎匆辶教踝B約,退火后克隆至组载体转化入感受态细胞,提取重组载体用限制性内切酶淝谐闪教跗危碇悄旱缬竟鄄觳迦肫渭霸靥迤蔚姆肿恿恳作初步鉴定;菌液送至上海生工进行重组载体的基因测序。┰龊吞崛重组载体初步鉴定正确后分别将含有空质粒和重组载体的菌液加到琼脂汤中扩大培养并高纯度提取质粒。、、肕方法检测细胞增殖活性;用瓼疨痉ḿ徐州医学院硕士学位论文目的方法甈,。将重用.
测细胞的早期凋亡率;经过一个月的抗生素压力筛选,采用半定量法和蛋白免疫印迹法检测各组细胞的一一表达和蛋白表达情况。;稳定转染一月后细胞早期凋亡率为.:一蛟趍B妓缴稀⒌鞍姿降谋泶锞灾陀诹蕉哉兆橘。结论应用扇偶际醭聊琍基因后人软骨肉瘤的增殖活性和喙鼗蛟趍胶偷鞍姿缴系谋泶降低,该实验为榈嫉娜砉侨饬龌虺聊品ㄌ峁┝死砺刍关键词甲状旁腺相关蛋白;扇牛夯虺聊蝗砉侨饬觯幌赴蛲徐州医学院硕士学位论文结果..
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前言样的结果—特异性阻断该基因的表达,从而正式表明扇畔窒蟮拇嬖凇而经质粒等载体转染‘勘可以实现在哺乳动物细胞内长期、稳定的表达软骨肉瘤是第二个最常见的原发性恶性骨肿瘤,是一组具有不同特点和行为模式的肿瘤,是从缓慢生长的非转移性病灶到高度侵袭性转移性肉瘤。治疗软骨肉瘤最有效的方法为大部手术切除ú皇屎霞怪凸桥璺⒉≌,疗效虽明显然,但是术后曛琢龀R赘捶ⅲ⑶页0樗嬲吒嗟那窒裕橹Х旨兑哺于原病灶。近几年,关于软骨肉瘤的研究已涉及到分子生物学、分子遗传学和免疫病理学【浚贙等人岢鲇τ胹技术沉默二级软骨肉瘤细胞的抗凋亡基因来抑制细胞的增殖分化,开辟了从分子生物学角度治疗抗辐射软骨肉年蚹谛憷鱿叱甧中用反义柚挂恍┗的表达,给对照组用正义坏ú辉黾痈没虻谋泶铮炊敕匆錜同等发现将⑷胄憷鱿叱婵上灾种铺囟ɑ虻谋泶铮⒅っ髁薌和所发现的正义幕蜓怪谱饔闷涫凳亲B际蔽廴疚⒘縟所造成的。将制备的叨却炕蠓⑾郑錜无基因抑制作用,反义基因抑制作用也很微弱,而用纯化后的⑷胂叱妫茨芨咝А⑻匾斓刈瓒相应基因的表达。基于此,近两年发现并迅速发展的一项新的基因阻断技术,,其相应的基因受到抑制这种发生在转录后的基因沉默现象被称之为扇。技术能够高效、高特异抑制目的基因的表达,并已成为简单有效能替代基因敲除的工具。近期的研究表明:短发夹状较凶鸥榷ê统て诘母扇判вΓ徐州医学院硕士学位论文瘤先例。
适用于长时间的。取杓瞥稣攵园谢虻膕哪0溆胫柿A雍笞H鞠赴峁鸇模板在细胞内转录形成的具有与囊种瓢谢虮泶镒饔茫V匾5氖钦庵肿饔每沙中辽僖与