文档介绍：实验一
凯氏定氮法测定蛋白质含量
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凯氏定氮法
是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法
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【目的】
了解凯氏定氮法测定蛋白质含量的方法、意义及应用
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【原理】
蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算系数，即得蛋白质的含量。
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，消化生成（NH4）2SO4，反应式为：
2NH2+H2S04+2H+＝(NH4)2S04
（其中CuSO4做催化剂）
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，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3 溶液中，反应式为:
(NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3↑+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O
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3. 用已知浓度的HCl标准溶液滴定，根据HCl消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算系数，即得蛋白质的含量，反应式为：
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3
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【操作步骤】
基本步骤如下：取样→消化→蒸馏→滴定→计算
称取适量样品（约相当氮30mg～40mg）,移入干燥的消化管中，，6g硫酸钾及20ml浓硫酸，置于消化炉上小心加热， 待内容物全部炭化，泡沫完全消失后，加大火力，并保持管内液体内微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，～1h。取下放冷待蒸馏用。
（建议：消化炉温控时间及温度：1阶段选择温度范围280℃左右，时间为20分钟左右； 2阶段选择温度范围450℃左右，～1h。
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NaOH、H2O注入管口，用橡胶管套如后分别置于NaOH、H2O盛器桶内，加液时按面板上相应开关，液体经电磁泵自动流入消化管内，注入毫升数视标尺所注位置而定。
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蒸馏过程：
（1）观察蒸发炉内水位，不能超过不锈钢电极（如果超过，要先排完水）。
（2）关掉排水阀，打开加热电源，打开冷却水（自来水开关），打开绿色蒸汽开关（只需打开任意一组），然后，观察电流表；等电流表升到4A左右，关掉蒸汽开关。待其回到0A后再打开蒸汽开关。电流升到4A后再关掉，这样反复开关（0-10）左右直到蒸汽从塑料管内喷出，让其喷半分钟左右，关掉蒸汽开关，仪器进入正常的待机状态。
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