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细胞计数板使用方法.docx

文档介绍

文档介绍:细胞计数板使用方法 实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时, 通过测定一定体积悬液中的细胞 的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。
具体操作:
将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。
将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静 置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。
计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算: 细胞数/mL=四大格细胞总数/4X 104
说明:公式中除以4,因为计数了 4个大格的细胞数。
公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:
(长)x (宽)x (高)= 而 1ml=1000mm3
(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团, 应按单个细胞计算,若细胞团 10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液)
细胞计数板的使用 血球计数板-基本构造
血球计数板是一块特制的厚型载玻片, 载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的 平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网, 每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。计数区的刻 度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方 格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成 25个大方格(大方格之间用 双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造, 它们都有一个共同特点,即计数区都由 400个小方格组成。
Ml •
1/400mm 。
,每
计数区边长为1mm,则计数区的面积为1mm2,每个小方格的面积为 盖上盖玻片后,,所以每个计数区的体积为 个小方格的体积为1/4000mm 3。
使用细胞计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量, 再换算成每毫升 菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。
细胞计数板-使用方法
•视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释(斜面一般稀释 100倍),以每小格
的菌数可数为度。
•取洁净的细胞计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片。
•将菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片 的下边缘摘入一小滴(不宜过多),让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,
勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。 也可以将菌悬液直接 滴加在计数区上(不要使计数区两边平台沾上菌悬液, 以免加盖盖玻片后,造成 计数区深度的升高),然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。
•静置片刻,使细胞沉降到计数板上,不再随液体漂移。将细胞计数板放置于 显微镜的载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数。 由于生活细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度。
.计数时若计数区是由16个大方格组成,按对角线方位,数左上、左下、右
上、右下的4个大方格(即100小格)的菌数。如果是 25个大方格组成的计数 区,除数上述四个大方格外,还需数中央 1个大方格的菌数(即80个小格)。 为了保证计数的准确性,避免重复计数和漏记,在计数时,对沉降在格线上的细 胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上,计数时则数上线不数下 线,数左线不数右线

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