文档介绍：生物仪器分析
实验名称：紫外可见分光光度计操作及应用实验类型：探究
一、实验目的和要求（必填）
三、主要仪器设备（必填）五、实验数据记录和处理
二、实验内容和原理（必填）
四、操作方法和实验步骤（必填）六、实验结果与分析
: 七、讨论、心得
装 一、实验目的和要求
1、掌握紫外-可见分光光度计的原理、基本结构与特点，学会仪器的使用方法。
订 2、掌握制作吸收曲线和标准曲线，能正确选择合适的测定波长，并对未知浓度的溶液进行测定。
3、掌握双波长测定物质的方法。
线 二、实验内容和原理
: 内容：1、用紫外可见分光光度计测定K：Cr2O7溶液标准曲线。
: 2、用紫外可见分光光度计测定叶绿素的含量。
: 原理：1、测定K2Cr2O-溶液标准曲线
: 当光作用在物质上时，一部分被表面反射，一部份被物质吸收。，不同物质对
: 每种波长的光都有对对应的吸收程度（A）或透过程度（T）,可以作出这种物质在实验波长范围内的吸
: 收光谱曲线或透过光谱曲线。用紫外-可见分光光度计可以作出材料在紫外光区和可见光区的对紫外光
: 和可见光的吸收光谱曲线或透过光谱曲线。根据比尔定律,某有色溶液的光密度D与其浓度C成正比，
： 即 D=KC。
! 当溶液浓度以百分浓度为单位，且液层厚度为1 cm时，K称为该物质的比吸收系数。
: 2、测定叶绿素的含量
i 叶绿素的双波长定量测定：是根据叶绿素对某一特定波长的可见光的吸收，用公式计算出叶绿素含
: 量。此法精确度高，还能在未经分离的情况下分别测出叶绿素a和叶绿素b的含量。
! 欲测定叶绿体色素混合提取植中叶绿素a和叶绿素b的含量，只需测定该提取物在某一定波长下
! 的光密度D ,并根据叶绿素a、叶绿素b在该波长下的吸收系数即可求出叶绿素的浓度。为了排除类 ； 胡萝卜素的干扰，所用的单色光应选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
: 已知叶绿素a和叶绿素b在红光区的最大吸收峰分别位于663nm和645nm,又知在波长663nm下，
: 叶绿素a和叶绿素b的80%丙酮溶液的比吸收数分别为82. 04和9. 27,而在波长645nm下，分别为
: 16. 75和45. 6o据此可列出光密度D与浓度（单位mg/L）的下列关系式：
j D663 =82. 04Ca + （1）
: D645 = 16. 75Ca+ （2）
: 解方程式（1）、（2）得：
i Ca = - （3）
: Cb=- （4）
: 将Ca和Cb相加，即得叶绿素总量CT,即：
CT= Ca+ Cb=20. 2 D645+8. 02D663 （5）
另外，由于叶绿素a、叶绿素b在652nm处有相同的比吸收系数（）,也可在此波长下测 定一次光密度（D652）而求出叶绿素a和叶绿素b的总量，即
CT= D652X 1000/34. 5
三、 主要仪器设备
紫外可见分光光度计、石英比色杯和玻璃比色杯（1cm）一套、移液枪（l~10mL、100~1000uL、20~200uL 等）、试管6只、容量瓶（50ml, 1只）、烧杯、洗瓶、10ml试管研钵等
四、 操作方法和实验