文档介绍：Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】
体外诊断试剂胶乳比浊法学习
胶乳免疫比浊法相关知识
很多公司开展了荧光胶乳免疫层析做定量分析及胶乳增强免疫比浊分析项目，关注胶乳标记技术的技术人员越来越多。本人总结了部分胶乳微球标记技术，并加以分类，以便朋友们查阅：
胶乳微球物理吸附：
反应微球带磺酸基、羧基、醛基表面的都是疏水微球，都可以用来设计被动吸附蛋白。磺酸基微球表面含带有负电荷的磺酸基团，pka大约为2，因此在酸性pH保持稳定。醛基微球表面也带有磺酸基团，但能和蛋白行程共价键。羧基微球表面含带负电荷的羧基基团，在以上时保持稳定。
带有疏水基团的蛋白的吸附和配位结合，是最简单和直接的标记方法。这种方法中，微球溶液和含目标蛋白的溶液混合，反应后，未结合的游离蛋白通过清洗步骤除去，从而获得胶体蛋白复合物。疏水吸附方法只能用于疏水微球（硫酸盐、羧基、醛基表面修饰的微球）。醛基表面修饰微球是一个特例，其疏水吸附结果取决于后来的共价结合。虽然物理吸附是不依赖pH的，但反应缓冲液的pH对蛋白的结构有非常大的影响，从而影响蛋白吸附到微球上的反应效率。一般，在被吸附蛋白等电点附近pH时，物理吸附效率会很高。
反应步骤：
；
%；
，10ml胶乳中加入1ml蛋白溶液。室温搅拌孵育2hr；
，除去未结合蛋白；
5.
将微球蛋白复合物用储存缓冲液溶解。
注意事项：

1）有效比表面积：粒径减小时，比表面积/mg微球值得增加；
2）胶体稳定性：蛋白对胶乳有稳定和去稳定作用；
3）免疫反应：最近标记量由免疫反应需要决定。
，快速搅拌混合，利于反应均衡。反应体积是1ml时，可用移液器吸取蛋白加入微球中，并吹打数次。如果反应体积较大时，用烧杯，边搅拌边加入蛋白，
，抗体有脱落的可能；
，所以应避免加入。
微球共价结合抗体方法：
一、一步法
pH 的reaction buffer，醋酸或MES buffer更合适
buffer溶解抗体，使其浓度为1mg/mL。
buffer 悬浮微球，使其浓度为1% w/v
，室温下持续搅拌20分钟
（52umol/mL）的EDC溶液，用前准备，现配现用。
。(Note 6).
，立即调节pH (Note 7).
，并将包被微球用storage buffer重悬。(Note 3 and 4)
B. 两步法
为了避免EDC将相邻微球之间的蛋白偶联导致微球聚集或者蛋白之间交流，两步法偶联抗体更合适。两步法中，在蛋白加入之前，多余的EDC被移除。两步法中，蛋白也可以使用更高pH的buffer来溶解，从蛋白的稳定性方面和加速蛋白和活化微球之间的交联速度方便考虑，是非常有利