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胶乳免疫比浊法相关知识
很多公司开展了荧光胶乳免疫层析做定量分析及胶乳增强免疫比浊分析工程,关注胶乳标记技术的技 ,并加以1%);
? NHS 水溶液(50mg/mL ) ;
? (100mM)的EDAC水溶液；
室温下搅拌反响 15〜30min； ( Note7)
清洗：MES buffer 或 DIW 清洗两次；(Note3);
用DIW冲悬浮微球到浓度为 1%;
同时, 一般为ph7〜9, 50mM~;
清洗完微球后,立即参加一定体积的抗体溶液.( Note 2).(注意：此处给出的例子,微球浓度和蛋白浓度和 buffer 分别为 % (w/v) , , 25~50mM );
室温下搅拌孵育2hr；
每ml反响液中参加 ***,室温搅拌孵育 10〜30min ;
清洗：storage buffer 清洗两次.(Note 3/4)
NOTES:
reaction buffer的组成根据蛋白种类的不同而改变,常用 buffer有醋酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、,由于在等电点附近,蛋白外表会有更多
,抗体也更紧密,,最终reaction buffer的选择,需要考虑最终抗体微球复合物的生物活性,因此,几个不同浓度的抗体和不同 ,反响 buffer的离子强度应该在 25〜50mM.
蛋白溶液应该在快速的搅拌下,,可以进行斡旋混合. 当大体
积时,应该在烧瓶或烧杯里搅拌剧烈些,蛋白溶液快速参加到漩涡中间.
移除未结合的化合物或蛋白,如果颗粒直径大于 ,可以通过离心的方法,微球可以重新悬浮,
然后搅拌,,
,滤膜孔径应该足够大, buffer应该
和storage buffer pH的改变,都会引起蛋白的脱落.
微球包被抗体后,参加外表活性剂或者去污活性成分,
球上,,像 BSA , casein或gelatin可以用来封阻任何空余的疏水性位点, 来.
此试剂和水反响,因此,溶解后应立刻使用掉.
EDC的用量,,每 mol的愈基应该再多加 2~3mol ,根据功
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能性检测结果,还需要进一步的优化.
此步骤,