文档介绍：实验七微生物的分离与纯化技术
土壤是微生物生活的大本营,它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所,是发掘微生物资源的重要基地,可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
一般土壤中,细菌最多,放线菌及霉菌次之,而酵母菌主要见于果园及菜园土壤中。
从混杂微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。
基本原理是选择适合于待分离微生物生长的条件,如营养成分、酸碱度、温度和氧的要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长,而抑制其它微生物生长的环境,从而淘汰一些不需要的微生物。
一、实验目的和内容
目的:
学习从土壤中分离微生物的方法,
学习无菌操作技术。
内容:
1 培养基的配制及相关物品的灭菌;
2 用稀释法从土壤中分离微生物;
3用平板划线方法分离微生物
二、实验材料和用具
牛肉膏蛋白胨固体培养基、高氏1号固体培养基,土豆蔗糖固体培养基,99mL无菌水(带玻璃珠) ,9mL无菌水,10%酚液,土壤样品
无菌培养皿、1mL无菌移液管、天平、称量纸、药勺、试管架
高压灭菌锅
三、操作步骤
(一) 固体培养基的配制(4人一组)
l. 称量和溶解
、分装(三角瓶) 、包扎。
3. 灭菌
(二) 土壤稀释分离(4人一组)

取表层以下5—10cm处的土样,放入无菌的袋或瓶中备用,或放在4℃冰箱中暂存。
(要无菌操作)
(1)准备
三角瓶装99mL水(加玻璃珠),1只;
,; 包扎、灭菌
角匙一只
(2)制备土壤悬液:
无菌角匙称土样1g,迅速倒入带玻璃珠的99mL无菌水瓶中(玻璃珠用量10粒左右),振荡5~10min,使土样充分打散,即成为10-2的土壤悬液。
在每根无菌移液管的报纸套上做好标记,如10-3 、10-4 、10-5。
无菌移液管用前从中间拆开报纸套,取出移液管,用后再插回报纸套,保护移液管尖端。
每次吸取土液,要将移液管插入液面,以口吹吸3次,每次吸上的液面要高于前一次,以减少稀释中的误差。
放土液操作时移液管尖不能接触下一稀释度液体的液面,每一个稀释度换用一支移液管。
(3)稀释:
用无菌移液管吸10-2的土壤悬液1mL,放入9mL无菌水中即为10-3稀释液,如此重复,可依次制成10-3~10-7的稀释液。
(混菌)
细菌:
取10-6、10-7两管稀释液各1mL,分别接入相应标号的平皿,每个稀释度接两个平皿。
取冷却至50℃(以不烫手为宜)的牛肉膏蛋白胨培养基,分别倒入以上培养皿中(装量以铺满皿底为宜,约10-15ml),迅速摇动平皿,使菌液与培养基充分混匀,但不沾湿皿的边缘,待琼脂凝固即成细菌平板。
倒平板时要注意无菌操作。