生物大分子分离纯化技术.ppt

文档介绍：第二章生物大分子分离纯化技术
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. 生物大分子的色谱分离纯化技术
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高效毛细管电泳
高效毛细管电泳(High-performance Capillary Electrophoresis, HPCE)是荷电粒子在直流高压的作用下,在毛细管中迁移,从而进行高效、快速分离的一种电泳新技术。其分离是基于带电离子在电场中的不同的电泳淌度。它的基本原理与常规凝胶电泳或自由电泳并无本质的差别。所以,HPCE可以看成是一种仪器化程度比较高的电泳方式。
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由于毛细管具有良好的散热性能,从而可以在毛细管两端加上高达30000 V 的高压、分离可以在很短时间内完成,分离效率非常高。这种方法所需样品体积只有L-nL级。所以,HPEC法的特点为:高效、快速、微量、易于实现自动化,而且溶剂消耗少、环境污染小等等。
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仪器
HPCE仪器的基本组成如图所示,它由毛细管,带电极的容器,高压直流电源,进样系统,检测器及数据采集和记录系统组成。比较先进的HPCE仪器还配有毛细管恒温设备,自动采样器,微制备组分收集器和基于计算机的自动化及数据评价系统。
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HPCE在毛细管中进行,管内径一般在25~100m之间,外径在100—400~1m。除了石英毛细管外,玻璃、聚四氟乙烯(PTPE)及聚氟乙烯-丙烯毛细管也有使用。
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为了保证HPCE分离的高效性,进样系统应尽量把nL-pL级的样品以最短的样品区带引入到毛细管中。
一般可采用电动法或流体力学法。
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高压电源需提供高达30 kV的直流电压。检测器位于毛细管的接地端,电流在3~300 A之间。电源应能以恒电压或恒电流(ITP)或恒功率的方式工作,其稳定件应达到设置值的%。另外,电源的正负极应可以切换,以适应带不同电荷的样品的分离。
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HPEC这种方法的灵敏度及高效性都依赖于检测器的高灵敏度,实际已经采用的检测器类型有多种。
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