文档介绍：Document serial number【KK89K-LLS98YT-SS8CB-SSUT-SST108】
大花惠兰石斛兰的组织培养
大花惠兰、石斛兰的组织培养
（1） 材料与方法
材料：大花蕙兰大花品种嫩芽。将母株放在温室内盆栽培养,于2～5 月陆续从母株上取8 cm 左右的新芽,剥去最外几层叶片,去芽的上半段，然后在超净工作台上采用三步灭菌处理法处理:先在70 %的酒精中处理6 s ,立即投入10 %的次氯酸钠溶液中10 min ,稍加摇动,取出后用无菌水冲洗,剥去外层2～3 枚叶片;再放入5 %的次氯酸钠溶液中5 min ,取出后无菌水冲洗,剥至最后1 枚叶片;再放入1 %的次氯酸钠溶液中1 min ,取出后无菌水冲洗数次。以上次氯酸钠溶液中均加入Tween20 以利杀菌剂更有效地发挥作用,在无菌条件下剥出约5 mm长地茎尖,以生长点为中心,用解剖刀把茎尖切成4 个小方块,分别接入已经准备好的培养基上。
培养基：
原球茎诱导培养基配方: MS + 0. 5 mg/ L BA +1. 0 mg/ L KT + 2 g/ L 活性炭（ ，AC）。
原球茎增殖培养基配方为:MS + 0. 5 mg/ L BA + 0. 8 mg/ L2 ,42D +2 g/ L AC,。
幼苗分化及生根养基配方为:MS + KT 1 mg/ L + NAA 0. 5mg/ L +2 g/ L AC。
培养条件
培养基pH 5. 4～5. 8 ,琼脂粉0. 6 %～0. 8 %,活性炭0. 2 %的,防止褐变,培养室温度22～25 ℃,相对湿度40 %,光照12 h/ d ,光照强度为2 000 lx。
结果观察
原球茎诱导：把茎尖切成的小块,接入圆球茎诱导培养基上，20天后（或更长时间）观察有无圆球茎出现。结果调查:圆球茎的诱导率= 产生圆球茎的茎尖数/ 接种茎尖数×100 %。
原球茎增殖：将诱导形成的较大原球茎块切割成直径3～8 mm左右的小块,接种在圆球茎增殖培养基上。1 个月后统计增殖量，结果调查:原球茎增殖率= 有新原球茎的块数/ 接种块数×100 %。
幼苗分化及生根：将增殖的充分成熟的较大原球茎块切割成直径3～8 mm的小块,接种在原球茎分化及生根培养基上。45 d 后统计分化率、生根率及根系生长状态。结果调查:幼苗分化率= 出芽数/ 圆球茎个数×100 %。幼苗生根率= 生根幼苗数/ 幼苗数×100 %。
壮苗、驯化与移栽：壮苗。1/2MS，7 %琼脂, pH ～，5～6周后植株长出粗壮的根系。光照2 000 lx；容器：23 cm ×30 cm ×8 cm四周镂空的塑料框；将瓶苗从培养室(恒温室)移至与外界相通的室内放置2 d后,去瓶盖炼苗3 - 7 d,洗净瓶苗根部的培养基,用1000倍甲基托布津或多菌灵浸泡组培苗根部,放置于通风阴凉处晾干水分至根系发白变软,即可用于移栽；基质。水苔和谷(麦)壳2：河沙1：珍珠岩1（体积,是大花蕙兰组培苗假植的理想基质；白天平均温度在20 ℃以上,夜间温度在15 ℃左右。假植相对湿度控制在80%以上。晴天上午10: 00至下午5: 00,作70%的遮荫处