文档介绍：北京化工大学
硕士学位论文
以卟啉为探针毛细管电泳分析蛋白质方法的研究
姓名:李昕
申请学位级别:硕士
专业:分析化学
指导教师:杨屹

~罗/关键词:蛋白质糠治鰆毛细管电珠卟啉洞勾怪亍访庖叻治觯摘要诠馄追治龅幕∩希芯苛嗣腹艿缬炯际醵课⒘康鞍字实姆椒ā?灵敏度提高了鍪考丁S朊腹艿缬静舛ㄎ⒘康鞍椎某S梅椒ā!Sü庋能性打下了基础。溶性卟啉——.,在毛细管电泳上定量微量蛋白质的方法,并探讨了两种卟啉作为蛋白质标记物应用于毛细管电泳免疫分析的可能性。ú舛ǖ鞍字实母春戏从Γ致哿说白质浓度与芤涸处光谱吸收值的线性关系。考察了反应温度及察了复合物形成后改变溶液酸度对复合物稳定性的影响,优化毛细管电泳分析行为。最后以魑1曜嫉鞍字剩⒈曜记撸匀搜G逯械鞍字首芰拷测器或增加毛细管光程的情况下,比毛细管电泳蛋白质直接进样、紫外检测的生后利用激光诱导荧光检测相比,方法操作简单,试剂稳定并降低了仪器的成活性的影响。讨论中发现,所研究的卟琳类高灵敏度染色剂与抗原蛋白结合后,在毛细管电泳可见光检测的分析并不比非标记蛋白在毛细管电泳紫外检测分析中更为灵敏。实验结果为进一步探讨两种卟啉化合物作为荧光标记物的可本论文从利用毛细管电泳定量微量蛋白质的角度出发,主要研究了利用水时间、缓冲溶液酸度、ǘ榷远抗叵档挠跋欤⑻教至朔堑鞍孜镏实干扰和采用不同蛋白作标准工作曲线时各种蛋白质的响应。优化了光谱分析中用魑L秸攵课⒘康鞍椎奶跫奶跫⒁。本论文所建立的毛细管电泳定量分析蛋白质的方法,在未使用荧光检最后考察了吐然:焖作为标记物应用于免疫分析和毛细管电泳免疫分析的可行性。讨论了蚳与蛋白质的结合方法和游离标记物的去除,测定了结合率和隑结合后对蛋白免疫本。
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浮扔年岁月刀日办学位论文作者签名:杏听学性大创工原化文京沧学明叼所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集声本人郑重声明:体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。卜
些室垡三垄芏塑主堂堡垒查——以卧啉为探针毛细管电泳分析蛋白质方法的研究鞍字史治龇椒ǖ慕蛋白质是一类含氮的天然高聚物,与营养、细胞结构、酶、激素、病毒、组成物质及生命活动的基础。早期的研究多是对其来源、分类、胶体性质及某酸彼此以肽键的形式连接起来的具有复杂结构的物质,一般把催化作用的酶、具有免疫功能的抗体、起运输作用的血红蛋白、有运动功能的性定量分析是生物化学和其他生物学科、食品检验、临床检验诊断疾病、生物药物分离提纯和质量检验中最常用的手段。迄今,测定蛋白质的分析方法有多光分析法,化学发光分析法等;以及近年来获得较多发展的以分离为基础的液光谱探针法测定蛋臼质量分析。但对微量分析而言,蛋白质自身的光谱在灵敏度方面常常不能满足需要,为此,人们发展了各种光谱探针分析方法。所谓蛋白质光谱探针,就是能与蛋白质发生相互作用的无机离子、有机小分子或络合物,这些物质与蛋白质结合生成超分子复合物之后,体系的光谱性质发生变化,从而可以提供蛋白质第一章绪论免疫、物质运转、遗传、生命的起源和进化等都有密切关系,是生物体的主要些生物学性质进行描述,至本世纪初人类的认识才进入到蛋白质化学时代,随着分离分析方法的改进,一些蛋白质才得到了提纯,并逐步了解了它们的组成和结构,以及它们在生命科学中的地位。蛋白质的主要部分是由约二十种氨基分子量在陨系亩嚯相当于霭被岬ノ叫做蛋白质。常见的具有肌红蛋白、生物膜蛋白以及某些激素、毒素等都是蛋白质。蛋白质的分离与定种多样,如使用金属探针、染料探针的各种分光光度法,荧光染料做探针的荧相色谱法和高效毛细管电泳法等方法【蛋白质含有色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸残基,故在紫外光区有吸收,并且在有荧光发射,因此可以用蛋白质的紫外吸收或荧光光谱进行定浓度或结构方面的信息【俊
箕早一妻:瑀:.兰法的改、银染色法北室堡兰垄堂塑主堂堡垒查:Ⅲ.、,.,.鹗籼秸双缩脲反应是指双缩脲在强碱性溶液中可与络合物生成红色物质的反双缩脲与的络合物好,反应使用单一稳定的试剂,因而可以广泛应用于各种自动分析仪。用于血清蛋白质测定时,干扰少,并且大多数干扰可以避免。但是,由于双缩脲的灵敏度低,因而在测定蛋白质含量低的样品如尿蛋白时产生了一定的困难。鲁情况下,尿蛋白的浓度较/,通常非蛋白干扰物的浓度相对高于蛋白质的浓度,而且多变,同时无机离子的含量高,在用双缩脲法直接测定尿白质,离心沉淀后蛋白质被浓缩,复溶蛋白质再与双缩脲试