文档介绍：高效毛细管电泳在蛋白质分析中的应用
北京华阳利民仪器有限公司
Beijing huayanglimin Instrument Co.,Ltd
网址: .com
E-mail:huayanglimin@
一、概述
, 而毛细管电泳(HPCE)技术是近年来迅速发展起来的一种新型分离、分析技术。具有高效、快速、简便、微量的优异特点。该技术在生物大分子、无机离子、光学异构体及有机药物分离、分析方面获得了广泛的应用。
分离原理
电泳仪
进样系统
分离系统
检测系统
数据处理系统
毛细管电泳的分离模式
毛细管电泳有多种分离模式,:
毛细管区带电泳CZE
胶束电动毛细管色谱MEKC
等电聚焦CIEF、等速电泳 CITP、
凝胶电泳CGE
毛细管电色谱CEC
亲和毛细管电泳ACE、免疫毛细管电泳CETA
非水毛细管电泳NACE
芯片电泳等
毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ,CZE
带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和
正离子:两种效应的运动方向一致,在负极最先流出;
中性粒子:无电泳现象,受电渗流影响,在阳离子后流出;
阴离子:两种效应的运动方向相反;ν电渗流>ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离。
是最基本、应用广的分离模式
毛细管等电聚焦电泳(CIEF,isoelectric focusing electrophoresis)
利用特殊的一种缓冲液(两性电解质)在凝胶(常用聚丙烯酰胺凝胶)内制造一个pH梯度,电泳时每种蛋白质就将迁移到等于其等电点(pI)的pH处(此时此蛋白质不再带有净的正或负电荷),形成一个很窄的区带,也同时达到浓缩的作用。
毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ,CGE
将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。
其具有多孔性,类似分子筛的作用,试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散,所得峰型尖锐,分离效率高。
常用于蛋白质、DNA等的分离,是DAN排序的重要手段。
特点:抗对流性好,散热性好,分离度极高。
无胶筛分技术:采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备。
胶束电动毛细管色谱( ,MEKC)micellar ic capillary chromatography,MEKC
缓冲溶液中加入离子型表面活性剂,其浓度达到临界浓度,形成一疏水内核、外部带负电的胶束。在电场力的作用下,胶束在柱中移动。中性分子在胶束相和溶液(水相)间分配,疏水性强的组分与胶束结合的较牢,流出时间长;
可用来分离中性物质,扩展了高效毛细管电泳的应用范围。
是色谱与电泳分离模式的结合