文档介绍:探讨分光光度法测定水中叶绿素a的方法改进
探讨分光光度法测定水中叶绿素a的方法改进
【摘要】针对水中叶绿素含量测定步骤繁琐,操作过程损失 多,人为干扰因素大等特点,在不改变原有方法的基础上,对叶绿素 处理方式进行改进:用***超低温冷冻萃取;超声波充分震荡破碎混 匀;微孔滤膜进一步过滤去除杂质干扰。通过试验,发现新方法测定 在很大程度降低了操作过程中人为因素的耗损,提高了检测效率和检 测质量。
【关键词】叶绿素a;分光光度法;醋酸纤维膜;***;微孔滤 膜
1刖B
随着现代经济的高度发展和人口膨胀,湖泊、水库正接纳越来越 多的氮、磷等营养负荷,也使得浮游生物及其他水生生物异常繁殖, 造成水体富营养化,严重影响供水水质。藻类计数和叶绿素含量的测 定是用于评价水体富营养化水平的两大生物水质检测指标,利用显微 镜对水中藻类计数耗时长、检测人员存在主观判断差异不同,测得的 藻类计数结果往往相差较大。叶绿素测定受人为主观判断影响相对较 小,含量比较稳定,因此,成为评价水质富营养化水平的主要水质指 标。
2叶绿素测定新方法
本文是根据《中国湖泊富营养调查规范》、《水与废水标准检验方 法》第四版等资料提供的操作方法,在不改变原方法的基础上,对含 藻水样经过过滤浓缩、冷冻萃取、超声波振动、再对离心后的水样进 行再过滤,通过分光光度计测定萃取液中叶绿素的浓度。通过反复试 验,取得了较好的试验结果。同原方法相比较,叶绿素测定含量提高 了 11. 8%〜23. 3 %o
3实验原理和材料
1实验原理
分光光度法测定水中叶绿素含量的原理是以有机溶剂***溶液 直接提取浮游生物浓缩样中的叶绿素,测定其吸光度,根据叶绿素a 在特定波长的吸收,用公式计算其含量。
2试剂
(1) 90%的***溶液
(2) 1%的碳酸镁悬浊溶液
(3) 仪器设备及器皿
1) 过滤装置:过滤器,醋酸纤维滤膜(直径50mm,孔径0. 45um)、 真空泵
2) 台式医用离心机(最大转速4000r/min)>超声波仪、微漩涡 器
3) 器皿:研钵,微孔滤膜、银子、剪子、塑料离心管、10mL标 准容量瓶
4测试方法的比较(方法II为改进方法,方法I为原有方法) 叶绿素测试步骤为:浓缩__萃取—离心—分光光度测定。两 种方法的不同之处有以下两点:
1萃取冷冻不同
方法I :抽滤完毕后,用银子小心去下滤膜放在培养皿中,置于 冰箱低温干燥6~8个小时后加入2~3mL90%的***研磨3~5min知 道成液体状,倒入离心管中,反复冲洗研磨器,直至研碎醋酸纤维滤 膜完全转出。
方法II:抽滤完毕后,立即用剪刀将滤膜剪碎,置于有螺帽的 离心管中加入6〜8mL 90%的***浸泡,然后置于零下20度的冰箱中 冷冻6〜8小时
这一步非常关键,方法I是纯手工搅拌,来保证滤膜和***完全 混合达到离心萃取的目的。方法II则是利用微漩涡器和超声波震荡的 原理对装有混合物的离心管进行避光震荡15min,萃取效果好。
5实验结果
(1)多次试验发现,方法I处理的叶绿素,在滤膜研磨过程中, 形成大量碎屑悬浮于提取液中。《水与废水标准检验方法》第四版方 法中要求OD750nm的吸光度不大于0. 005,如果离心后不能很好地沉 淀分离,是必对测定结果产生很大的影响,在OD7