文档介绍：柔嫩艾美耳球虫蚩寺”泶及其免疫保护性研究中文摘要崮郯蓝虺鍱基因的克隆与序列分析崮郯蓝虺鍱基因的原核表达鸡球虫病是危害养鸡业的重大疾病,其病原有郑ǘ研桶蓝虺⒉际习蓝虺⒕扌桶蓝虺⒑突喊蓝、毒害艾美耳球虫⒃缡彀蓝虺和柔嫩艾美,其中闹虏⌒宰钋俊3て谝岳矗η虺娌〉姆乐沃饕R览药物。但由于球虫对药物普遍产生了耐药性,引起药效下降。在鸡饲养周期中长期添加药物导致药物残留肉蛋,直接危害人类健康。为此,鸡球虫病的防治方法由化学预防转向免疫预防。目前,临床上用于免疫预防鸡球虫病的疫苗有活虫苗和由天然蛋白组成的亚单位疫苗两大类。虽然鸡球虫病活疫苗有着较强的免疫效果,但存在着如扩散病原的风险、球虫虫株的抗原变异、致弱虫株毒力易返强、疫苗接种剂量难以控制、疫苗影响饲料报酬、免疫程序繁琐、操作和免疫后的监测和管理技术要求高等一些突出的问题,所以亚单位疫苗尤其是基因工程疫苗将成为最理想的鸡球虫病防治策略。谂渥犹褰锥翁匾煨员泶锏囊恢侄嗫奖椿颍浔泶锊镉卵囊壁形成相关。尽管国外学者报道了该基因的序列,但该基因的体外表达及其重组蛋白的免疫保护力等尚未见有报道。为此,本研究对渥犹錏基因进行了克隆和原核表达,对表达产物的免疫原性和鸡体免疫保护力进行了分析与评价,并对基因在虫体体内表达定位和功能进行了探析,旨在为鸡球虫病基因工程疫苗的研制奠定基镏葜甏炕呐渥犹逯刑崛∽躌,经扩增出蚱筛选后,对经酶切和ㄎQ粜缘闹刈橹柿=胁庑颉=峁允荆寺〉腅,具有一个大小为的完整开放阅读框,与畉株基因序列比较,。用测软件分析虮嗦肭目乖裕允敬嬖个抗原决定簇,,大小为=ǜ没蚱斡朐靥錺曹李琴:柔嫩艾美耳球虫蚩寺”泶锛捌涿庖弑;ば匝芯虫耳球虫蚴荅础。从段。,常规转化大肠杆菌感受态细胞,蓝白斑基因全长为预根据虻腛序列和质粒酶切位点设计引物,以重组质粒樱菇ㄖ刈楸泶镏柿。转化大肠杆菌感受态细胞
崮郯蓝虺鍱基因表达产物的体内定位崮郯蓝虺嬷刈榈癐刍拿庖弑;ばЧ途扌桶蓝虺目蹈囱G逦R豢菇蠾産觳猓允重组蛋白具有一定交叉免疫原性。间接椒ḿ觳馐罂怪刈榈鞍譋多抗和鸡康复血清,显示体外重组蛋白能被感染募ρ粜匝G迨侗穑⒛艽碳せ宀直鹌松比∶こψ橹谱魇橹衅=蠬旧ê鸵允罂怪刈榈鞍譋多抗为一抗的免疫荧光组织化学染色,分别用生物光学显微镜和荧光显微镜观察。结果显示:こθ廾掀は赴诖嬖诖罅颗渥犹寮吧倭拷墒斓穆涯遥诖笈渥犹宓某壁体和卵囊壁上有荧光标记。结论:虮泶锊镏饕4嬖谟诖笈渥犹宓某杀谔内,并参与卵囊壁的形成;本研究所克隆的基因确实为配子体蛋白基因。指标,对重组蛋白的免疫保护效果进行了初步研究,并对其诱导的特异性免疫应答水平进行了检测。结果显示:重组蛋白免疫后均能诱导~定的细胞免疫和体液免疫水平,抗体水平、水平、水平等免疫指标均高于未免疫未攻虫组:与未免疫未攻虫组相比,重组蛋白免疫组在一定程度上能提高增重,降低病变记分和减少卵囊产量,其中又以重组蛋白中剂量组的免疫保护效果稍好,但均未达到卵囊免疫组的免疫保护水平。关键词:柔嫩艾美耳球虫;颍豢寺。辉吮泶铮幻庖弑;ば后,经过诱导,融合蛋白在大肠杆菌中成功表达。表达产物主要以包涵体形式存在,。芰浠朴鹑饧θ斯じ腥綞镏葜旰感染后以黄羽肉鸡为试验动物,以平均增重、相对增重率、病变记分与卵囊减少率等为评价扬州大学硕士学位论文
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