文档介绍：首都师范大学
硕士学位论文
乙肝表面抗原基因导入莴苣植株的研究
姓名:王昌正
申请学位级别:硕士
专业:分子遗传学
指导教师:晏月明;胡赞民

具体原因有待进一步分析。—乙肝表面抗原基因导入莴苣植株的研究堵烫灞泶镌靥錚—捎昧嘶蚯菇榈挤ń玜导入莴苣。捎谝摘要本实验采用农杆菌介导法和基因枪介导法,研究了乙肝表面抗原基因既肟缮车妮生菜的核基因组和叶绿体基因组,并期望获得转基因莴苣植株,从而建立以莴苣为生物反应器生产可食用的乙肝疫苗。研究结果如下:腋伪砻婵乖与细胞核载体、约耙堵烫灞泶载体卸ㄏ蚩寺。璓和测序鉴定都获得了重组子,分别命名为.—.F渲蠵猘含烟草花叶病毒成型启动子,產含马铃薯蛋白酶抑制剂基因的损伤诱导型启动子,猘含有莴苣启动子与终止子,并在目的基因两侧设有叶绿体同源片段。;蜉纳秆⊙沽εǘ鹊娜范ǎ敲顾为疞,壮观霉素时能有效的将转化和非转化植株筛选出来。赴嗽靥錚猘、猘均采用农杆菌介导法将既胼模胞核转化获得了生长良好的抗性莴苣植株,经.、斑点杂交分析证实,蛞颜系捷幕蜃橹小F渲校琍產转化率高于產,说明莴苣转化中舳佑庞赑舳印绿体转化植株生长较为缓慢,筛选周期比细胞核转化长,并且一段时间后会出现白化现象。故实验停留在抗性小苗获得的结果,还没有进行下一步的检测,关键词:乙肝表面抗原基因,细胞核转化;蜉模堵烫遄;
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缩略词苯氨基腺嘌呤碱基对羧苄青霉素脱氧核糖核酸溴化乙锭乙二胺四乙酸吲哚乙酸一异丙基巯基半乳糖苷—卡那霉素千道尔顿嘌烈宜多聚酶链式反应利福平转,—猤瓸甮
文献综述第一章转基因植物疫苗的研究进展效、廉价、易于推广应用的疫苗,科学家们努力寻找新的表达系统,用转基因植物作生物反应器是一个新兴的研究领域,用它生产基因工程疫苗具有独特的优势及可观的应用前景,引起了植物学家、免疫学家、分子生物学家等多方面专家的极大兴趣和关注。转基因植物生产疫苗是晏岢龅摹8眉际跏抢梅子生物学技术把重组的疫苗基因导入植物,并使植物能够大量表达的一类生物技术。利用该技术国外至今已获得成功的有乙型肝炎表面抗原,,不耐热的肠毒素堑ノ琫,⑴滴挚瞬《就饪堑發刍,,⒒袈一【舅谺亚单位,,⒖袢〔《綠蛋白,嘀忠呙纭9谠诶米;蛑参锘病毒载体生产疫苗的研究方面还远远滞后于其它国家,有关论文报道甚少。;蛑参锷呙绲脑或植物疫苗把植物基因工程技术与机体免疫机理相结合,生产出能使机体获得特异抗病能力的疫苗。动物试验已证实,转基因植物表达的抗原蛋白经纯化后仍保留了免疫学活性,注射入动物体内能产生特异性抗体;用转基因植物组织饲喂动物,转基因植物表达的抗原递呈到动物的肠道淋巴相关组织,被其表面特异受体特别是赴侗穑衬ず吞逡好庖叻从琫;蛑参锷呙绲姆椒目前,利用转基因植物生产疫苗可采用两种不同的表达系统:稳定表达系统和这一方法是将抗原基因构建在植物表达载体上,利用农杆菌或基因枪介导的方法,将抗原基因转化到植物细胞中并与植物基因组整合,获得稳定表达的转基因价复合疫苗的转基因植物;三是通过特异性表达启动子使抗原基因在器官或组织细菌、酵母及哺乳动物细胞等是目前生产基因工程疫苗的主要生产系统,这些系统表达的基因工程疫苗在防御传染病中起着重要作用。为了生产更加安全、有,⒖谔阋卟《究乖,,⑷司尴赴毒糖蛋白转基因植物疫苗是瞬时表达系统。.榷ū泶锵低植株,,1痉椒ň哂幸韵掠诺悖阂皇峭ü行曰蛭扌苑敝车姆椒ǎ可以很容易地获得大量的转基因植株;二是通过有性杂交的方法,可以获得生产多,一琫
中特异性表达。在稳定表达系统中,高效表达载体的构建十分关键,目前主要采用实际需要。另外,适于生产疫苗的某些植物,其商效转化系统尚未建立。组中。此外,尚有几个问题需要解决:一是抗原的纯化;二是弱毒株系的选择,即病毒对植物的侵染不会使植物生长异常,还要保证抗原基因的整合不会使病毒失去侵的高低,很大程度上取决于良好受体再生系统的建立,同时对不同物种也要采用不同的转化方法琫,R虼耍参镆糯;氖芴逑低场⒃靥系统和遗传转化方法是转基因植物基因工程疫苗生产技术的关键。.参镆糯;氖芴逑低臣捌涮匦织。愈伤组织可以培养成完整的转化植株。该受体系统转化率高,可获得较多的转化植株,取材广泛、适用性广。但再生植株无性系变异较大,转化的外源基因力,具有全能性。原生质体在体外比较容易完成一系列细胞操作或遗传操作,互相之间可以发生细胞融合,而且还可以直接高效的捕获外源基因。但缺点是嵌合体少,遗传稳定性更差,培养周期长,难度大,再生频率低。槌尚捅泶锲舳樱泶锼降停匾煨缘母咝П泶锲舳踊共荒苈本方法是应用植物病毒作为载体,将目的基因插入病毒基因组中,然后将重组病毒接种到植物叶片上,任其蔓延,外源基因随病毒的复制而高效表达