文档介绍：重庆医科大学
硕士学位论文
Hyper-IL-6重组腺病毒的构建及其促肝细胞增殖的研究
姓名:蒋奕
申请学位级别:硕士
专业:内科学(传染病)
指导教师:秦波
20060401
堑犁室枷辏粤加ョ重庆医科大学研究生学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书论文作者签名:指导教师签名本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业高校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学期卫究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。学位论文作者签名日期位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。日
一——符号说明蔓壅垦壁查兰堡:竺窒生兰垡兰苎英文缩写英文全称中文全称自细胞介素白细胞介素芴可溶性白细胞介素芴超级白细胞介素腺病毒不含目的基因的重组腺病毒重组腺病毒一重组腺病毒焦磷酸二乙酯脱氧核糖核酸核糖核酸脱氧核苷三磷酸碱基对千碱基对千道尔顿牛血清白蛋白绿色荧光蛋白胎牛血清辣根过氧物酶二氨基联苯胺二甲基亚砜感染复数.,....—一
磷酸盐缓冲液每分钟转数聚合酶链式反应逆转录氨苄青霉素卡那霉素培养基含氨苄青霉素的培养基十榛撬崮凰募谆叶胺聚丙烯酰胺凝胶电泳聚偏氟乙烯三羟甲基氨基甲烷甲基噻唑基四唑增殖细胞核抗原苯甲基磺酰氟部分肝切除重庆医科大学硕士研究生学位论文現狟琋,甆—琋,
第一部分重组腺病毒的构建及其在真核细胞中的表达摘要用一富含甘氨酸序列的接头经┰鋈诤希⒍ㄏ蚩寺≈重组腺病毒质粒。以酶切及椒ń屑ê螅刈橄俨《局柿S结果:┰龀腍编码序列并成功构建重组目的:构建融合基因超级白介素一,应用腺病毒载体构建系统构建重组腺病毒/。用—感染人肝细胞鄄煜赴贖和蛋白的表达情况。方法:采用基因拼接法将人类虸的基因甤俳獺寺≈链┧笾柿狢,酶切线性化后与腺病毒骨架质粒在细菌内同源重组,构建咝曰笞H细胞,于荧光显微镜下观察绿色荧光以确定转染效果。,法检测一腥綥细胞后一牡白表达情况。质粒猚瓾ㄖな倒菇ǖ娜诤匣虻谋嗦胄蛄杏肜砺推断完全一致。重组腺病毒质粒经酶切后可见一条和约的条带,表明同源重组成功。将线性化的重组腺病毒质粒转染胞后于荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光。重组腺病毒—能在赴斜泶锍鯤基因和蛋白,条带分别为和重庆医科大学硕士研究生学位论文
结论:我们成功构建了同源重组腺病毒—,并且在人类肝细胞械玫搅薍—一蚝偷鞍椎谋泶铮R院蠼懈卧偕相关疾病的基因治疗等研究奠定了一定基础。关键词:甀,腺病毒,同源重组,基因表达里鉴垦型奎兰堕兰丈夹┍ぼ左右。
第二部分重组腺病毒对肝细胞生物学特性的影响摘要研究—表达的一訦细胞中急性时相蛋白~。甊ḿ觳釧狧一刈橄俨《靖腥綡术细胞后产生的急性时相蛋白一结合珠蛋白膍泶锏牧康谋浠甅法检测—重组腺病毒对人肝细胞ぷ刺挠跋臁庖呦赴Хü鄄霯细胞感染—重组腺病毒后其增殖核结果:在—重组腺病毒刺激下,赴慕合珠蛋白的表达相比较于空腺病毒椤峁篈猼一刈橄俨《尽狪重组腺病毒均对细胞有促进生长增殖的作用,但是—组的促增殖作用显著高于—一。目的:对人正常肝细胞的促增殖作用,为以后进行肝再生相关疾病的的基因治方法:抗原的表达情况。结果::芯可宦畚
——一免疫细胞化学结果:——.哂泻芮康拇俑蜗赴殖的能力。结论:—表达的一邢灾纳锘钚裕芄幌灾碳赴泶锝岷现榈鞍椎牧吭黾樱徊⑶叶訪细胞有很强的促增殖关键词:.岷现榈鞍祝琍皇鉴坠型奎兰塑主塑塑竺兰些堡兰作用。
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