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表示了谢意。
研究生签名牙触鸟时间年‘月》日
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研究生签名井牙时间刁矽梦年子月冰日
导师签名才峨时间必年了月
中国农业大学博士学位论文摘要
摘要
为了探讨不同转基因结构形式对诱发植物基因沉默,以及在病原介导抗病性中的作用,构建了
五种不同结构形式的烟草花叶病毒外壳蛋白基因植物表达载体
和借助于根癌农杆菌菌株将它们转
入烟草。经过检测,证明五种载体均成功地转入了烟草
植株,转化率约在之间,插入拷贝数到个不等。代的显示,除载体转
基因植株中的外源基因没有按照预期的那样转录产生反义以外,其它基因结构形式均得到了正
常转录。种基因结构形式的代转基因植株的抗病试验证明,到开花期为止仍有部分植株不表现
病状,而且载体转基因植株的发病率低于其它结构形式的转基因植株。这说明,外源
基因的直接重复序列所介导的抗病性水平较其它结构形式更高。对代转基因植株的甲基化分
析显示,与重复序列相比,外源基因的插入拷贝数与其甲基化关系更密切,甲基化程度也和植株的
抗性有一定的正相关。至于外源基因直接重复对转录后基因沉默水平的影响,结果显示,
相对于含有个基因直接重复序列的转基因植株,由个相同基因构成的直接重复序列的外源基因
更容易形成转录后基因沉默。
针对目前我国西瓜生产种植中的病毒病危害,为了培育抗多种病毒的转基因西瓜,我们构建了
同时含有西瓜花叶病毒外壳蛋白基因、西葫芦黄花叶病毒复制酶基因和
黄瓜花叶病毒复制醉基因的三价植物表达载体,经根癌农杆菌
菌株介导转化西瓜子叶外植体,获得再生植株。经和
检测,证明目的基因成功地导入西瓜植株,并能够在后代植株中遗传,最终转化效率约
为。分别在温室和大田中对代转基因株系进行的病毒接种试验和抗病性筛选鉴定结果表
明,所得到的转基因西瓜株系分别表现出感病、免疫和症状恢复等不同的类型。其中对代植株的
检测表明。转基因株系对和的抗病能力普遍达到中等水平以上,并保持了受体
西瓜品系原有的优良农艺性状,为抗病毒西瓜新品系的获得奠定了基础。
关键词不同结构形式甲基化转录后基因沉默西瓜病毒病转基因抗病性。
巾国农业大学博士学位论文
砰
衍
几
几
玩
妙
切
中国农业大学博士学位论文第一章文献综述
第一章病毒基因介导的转基因植株抗性机制的研究进展
交叉保护是植物病毒学中的一个古老的命题。这一现象由等于年首次报道的
所谓交叉保护是指预先感染了温和株系病毒的田间作物如烟草、番茄、苹果等可以防御与之亲
源关系相近的强毒株系病毒的侵染。以后在类病毒中也发现了这一现象。八十年代初,人们曾一度
利用弱毒株系来防治生产中的某些重要病毒病,并取得了一定的防效。但这种方法也有其自身的
缺点。有些对农作物侵害性极大的病毒没有温和型毒株,或者温和型毒株虽然能对烈性毒株有一定
的抑制作用,但仍然会在一定程度上降低该作物的产量。所以交叉保护很难在农业生产上得到广泛
的应用。年,和首先提出了病原介导的抗性
这一概念他们认为在特异宿主中表达病原体的基因,可以使宿主获得抗性。随着分子生物学技
术和遗传工程的不断发展,人们根据病原介导的抗性原理开始尝试利用转基因技术把病毒自身的基
因转入植物,以期获得抗病毒的转基因植物。年等将烟草花叶病毒
外壳蛋白基因转入烟草,转基因后代植株显示了对的明显抗性【
随着利用转病毒外壳蛋白基因获得病毒病抗性植株的普遍应用,人们发现,这种策略并不总能
得到预期的结果。如转黄瓜花叶病毒基因的植株,当它们在田
间遇到高温时,就失去了抗病毒的能力,转基因的烟草当用接种时就失去了
抗性。于是人们又进行其它途径的探索。如利用病毒的不同基因如运动蛋白基因、复制酶基因,
病毒的反义,双链,卫星等进行基因转化。期望获得抗病毒的效果。虽然人们利用
病