文档介绍：基因工程的基本操作程序
目的基因的获取
基因表达载体的构建
将目的基因导入受体细胞
目的基因的检测与鉴定
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目的基因主要是指______________________
编码蛋白质的结构基因
目的基因的获取
即：将需要的基因从供体生物细胞内提取出来
　目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。
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获得目的基因的方法
1）从基因文库中获取目的基因
？
？
2）
2）利用PCR技术扩增目的基因
3）人工合成
含有一种生物的全部基因
含有一种生物的部分基因
根据基因的有关信息：如基因的转录产物mRNA
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质粒，使其出现一个切
口，露出____________。

的基因，使其产生_____
____________。
—— 核心
，
再加入适量___________，形成了一个重组
DNA分子（重组质粒）
限制酶
黏性末端
同一种限制酶
的黏性末端
切口
DNA连接酶
相同
(二)基因表达载体的构建
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科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。
起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。
然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。
资料:
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基因表达载体的组成：
目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。
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(三)将目的基因导入受体细胞
常用的受体细胞：
动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。
将目的基因导入受体细胞的原理：
借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
转化——
目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程
受体细胞
稳定
表达
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方法
导入植物细胞
导入动物细胞
导入微生物细胞
农杆菌转化法
基因枪法
花粉管通道法
——显微注射法
—— 感受态细胞吸收DNA分子
(三)将目的基因导入受体细胞
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(四)目的基因的检测与鉴定
——检查是否成功
检测—
鉴定—
①检测转基因生物染色体的DNA
上是否插入了目的基因
②检测目的基因是否转录出了mRNA
③检测目的基因是否翻译成蛋白质
抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等
方法——
方法——
方法——
DNA分子杂交
DNA分子杂交
抗原-抗体杂交
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