文档介绍：中国医科大学
博士学位论文
溃疡性结肠炎患者外周血调节性T细胞功能状态的研究
姓名:刘香
申请学位级别:博士
专业:内科学
指导教师:郑长青
20070401
·英文缩略语·英文缩略语英文全称中文全称炎症性肠病溃疡性结肠炎调节性赴抗原呈递细胞喙乜乖糖皮质激素诱导的芴转化生长因子一.
主盂日期:兰竺乙￡乡中国医科大学研究生学位论文独创性声明中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。论文作者签名:本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许内容除外圆捎糜坝⑺跤』蚱渌侄伪4媛畚摹指导教师签名:表示谢意。论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C期:日
调节性赴δ茏刺难芯溃疡性结肠炎患者外周血·中文论著摘要·升趋势。其病因、发病机制目前仍不明确,认为与免疫、环境、感染及遗传等多种刖炎症性肠病琁且蛔槔奂拔赋Φ赖淖陨砻庖性疾病,包括溃疡性结肠炎珻。近年来,炎症性肠病绕涫抢Q裥越岢ρ椎姆⒉÷食手鹉晟因素相互作用有关,其中免疫因素在⒉≈衅鹱胖匾W饔茫乙殉晌Q芯咳炎症性肠病由过强的免疫反应所介导,馨拖赴谄渲衅鹬匾W饔茫玊胞介导的免疫失耐受机制不很清楚。机体内存在以抑制免疫反应为主要功能特点的较独立的馨拖赴侨现倾向于称为调节性馨拖赴琓,其淋巴细胞平衡是机体调节免疫反应的重要模式之一,其紊乱可能是很多自身免疫性疾病的发病机制【縜过强的免疫反应可由致病性赴促炎促免疫赴研究调节性赴诓∪嘶迥诘墓δ茏刺卮鹧字⑿猿Σ〉姆⒉∈欠裼氲鹘性馨拖赴目乖匾煨悦庖咭种乒δ苋毕萦泄厥侵档贸⑹缘摹】。【、.、虸等,能够初步的评介出调节性赴脑赨械吾琔和疭点。中细胞是目前所认识的最重要的一群,调节性馨拖赴虏⌒訲原发性功能增强引起,也可能由调节性赴庖咭种乒δ茉⑿韵陆邓稹从正常人和患者外周血中收集并分离淋巴细胞和单核细胞,用自体肠道菌群制作成抗原,在体外培养中刺激淋巴细胞,然后检测代表调节性赴谋型、B家蜃覨,。.▲上.
材料与方法一、材料二、主要试剂及仪器Ⅳ籔三、淋巴/单核细胞分离四、肠道菌群抗原的制作五、细胞培养研究对象均来源于于中国医科大学盛京医院内镜中心做电子肠镜检查者。对照组例,男例,,平均岁;溃疡性结肠炎组例,男例,女炅辏骄辍,抗人疊虲亮蓝总蛋白定量试剂等。流式细胞仪、低速低温离心机、跸洹⒊赴碎仪、酶标仪、可见光分光光度计等/嗝顾亍齑竺顾稀释后加入胄墓埽用连接偶映ふ胪返淖⑸,痬离心』野撞愕ジ龊讼赴海琍洗危/ヅQG澹琀及双抗煨赴ǖ兔芏植闫淘谙赴合旅妫痬离心,取低密度卸我陨及至高密度卸蔚南赴海直鹱魑5ズ讼赴土馨拖赴琍洗危苔盼蓝染色计数活细胞均在%以上,取细胞悬液作离心涂片,狦染色鉴定,淋巴细胞和单核细胞的纯度分别在%和%以上。肠镜下取大肠标本,将其表面所带细菌接种到疱肉培养基中,液体石蜡封闭,培养小时,离心、超声破碎及考马斯亮蓝法测细菌抗原总蛋白浓度。珻一/悸硭用肝素抗凝管采外周血,谟肦含//,每管郝釉用/,疞和高密度/,疞/,
二、未刺激淋巴细胞虵的表达六、流式细胞术七、八、统计分析结果一、淋巴/单核细胞的分离效果及鉴定三、未刺激淋巴细胞的表达培养基为约含%自身血浆的顺パP“澹煤ǹ/青霉素痬齑竺顾、后作为完全培养基。单核细胞以个/孔加入孔板,并以/加入自身来源的肠道厌氧菌群抗原,对照孔不加细菌抗原,小时后每隔∈卑肓炕灰一次,共危韵∈统ハ妇乖缓蟀/孑尤胱陨淼牧馨拖赴分离第旒盎旌吓嘌斓牧馨拖赴糜诹魇较赴觳釩、、培养上清液中细胞因子..,按照说明操作。所有数据均用硎荆扑阌肧完成,比较采用独立样本的淋巴和单核细胞计数在%以上,淋巴细胞的纯度为%以上,单核细胞的..个单核细胞。外周血淋巴细胞、谋泶镌诙哉兆楹屠Q裥越肠炎组间无明显差别。约%的赴北泶颋,%。、癋的表达,操作按照试剂盒说明。%以上,从人外周血中分离出:隽馨拖赴同时表达N蘼墼诙哉兆榛故荱椋珻和谋泶锞哂蟹浅显著的相关性.。
在正常人和小鼠