文档介绍：东北林业大学
硕士学位论文
小黑杨花粉植株转抗虫基因的研究
姓名:常玉广
申请学位级别:硕士
专业:林木遗传育种
指导教师:刘桂丰
20040301
摘要在建立了小黑扬花粉植株再生优化组培体系:分,七培养基为/嘌狹疞的基础航幸传转化。确定农杆菌介导的小黑杨遗传转化体系:在上述分化培养基和生根培养基的基础上进行遗传转化;,℃,置暗处共培养蛔H牒敲顾嘏ǘ任疞的选择培养基上,进行选择培养,同时用浓度疞的头孢唑林钠对叶片进行脱菌;得到卡那霉素抗性芽后,在生根培养基上进行生根培养疞卡那霉素,疞头孢唑林钠在建立小黑杨花粉植株遗传转化体系基础上,利用农杆菌介导法向小黑杨檀株基因组中导入抗虫基因┲肷背骐挠隑駽末端肽序列连接在一起表达的一种融合蛋白基因竦个转化无性系,转化率为ィ珿表达阳性率为%,并对其进行分子生物学检测和饲虫试验。卡那霉素抗性植株的分子生物学检测表明,觳庋粜月示%.斑点杂交阳性率%,转基因植株目的基因的猄咏谎粜月%。说明外源基因已稳定整合到小黑杨花粉基因组中。转基因小黑杨的虫饲试验表明,接舞毒蛾溆壮妫背媛蚀%~.ィ阴性对照植株虫饲死亡率ァ%,阳性植株饲喂舞毒蛾死亡率高于阴性对照植株饲喂舞毒蛾死亡剩壹性谒浅娉跗冢骰虮泶锊锼浇细摺R匙基因植株的尚存活舞毒蛾平均虫体重增加缓’巨,对照体重为处理体重的倍与倍,外源基因严重抑制幼虫的生长。说明外源基因在转基因小黑杨中能够『撼1泶铮转基因植株表现一定的抗虫性。通过分子生物学检测和转基因植株的饲虫试验,充分说明了外源基因诤基因何榷ㄕ系叫『谘罨蜃橹校夷芄弧篎常表达。关键词:
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⒎植肌⑻匦据统计,全潮森林病虫害发生面积胰∞年代酶每年騢上升至现在的騢,嚣Ⅱ蟊掇树属扬攒科、杨弱痷辏,共约嘀郑难烊环执乐饕程托半球鲍滠帮及寒带。我瀚原产枥瓣稀,除热带外,分南‘凡遍全匿。从大兴安岭到薛与挺雅山,从武夷山到新疆的阿尔泰山,繁商着各种杨树,约在北纬。~。,东经。~<洌创雍麓胍抖八椭亚热带露绿阔时林区,从森林草原医到于旱荒瀵区均可见天然生长敬杨褥。在我国森耩资源,特潮建在天然次生拣帮蔻漠遗区森林资源中越着显著作用,是我国的宝贵财富。杨属共分桑猩窖钆伞⒋笠堆钆伞⑶嘌钆伞⒑钆伞⒑谘钆伞U个杨树派我国均鸯。我藿歪麓予毽赛榜褥中心分布区域内,新竣我国榜褥辞类之多,分毒之广,怒其它鼙家不可比拟的。胡杨派中的胡杨属于中一西亚荒漠孑遗树种,是古地中海成分,耐大气干旱与盐碱,主癸分毒在羲疆漤羹本及彗纛。银自强、锻获糖等,分蠢杰我莺湿带摹瓤、蓑漠区懿由建取我国大部分青杨派的种,集中分布在温带针阔叶混交林区绱笄嘌睢⑾阊,以及温带落叶阔叶混交林区缧∫堆睢⒓寡。毛白杨、河北杨则是我国中原地聪和西北地区的特有杨树秘。,⒑谘锸翘∈毖钣牒谛苍咏凰缰校〕隽G梭环鞭颍怨诨圮捉⒐瓆嵇试验表明,小黑杨具有抗寒、抗旱、耐癀薄、比较耐盐碱、速生等优良特性,已成为黑龙江省内平原地区普遍栽培的杨树【。杨树的虫藩较严重,抗搬问题成为人们研究的课鼷。据全国森林瘸虫害普蛮统计结果,我国杨树害虫的种类为郑粲疲淙谎钍骱Τ娴闹掷嗪芏啵ù蟛糠种掷蹙杂食性、多食性,有豹不仅危害其它秫本或果树,露且蔻害农作物。单一危害搦辩豹害虫羊率类较少。近年来对杨树造成严重危害的主要害虫有娥于害虫,如光侑星天牛、黄斑星天牛、黎天牛和云斑天牛等;食叶搿虫如杨尺蠛、杨小舟峨、杨扇舟蛾、分月扇舟蛾和杨梢叶甲等;拨糖害虫和吸汁害虫如扬黄漆叶螟和草鼹蚧等【俊每年因病虫害而减少的林木生长量达多万,遗成的直接经济损失多亿元。全国森林病虫害的发生面积占总森棒萄积的%,。林木不同于作物,对林水进行病虫害人工防治和盘控较作物难,长期使用化学防治导敛小黑强花硷挺株转抗虫基闲的研究
害虫产生耐药性,用药量越来越大,形成恶性循环,并且过量地使用农药,不仅杀灭害虫的天敌,对自然生态平衡造成严重的破坏,直接威胁着人、畜的安全。生物杀虫剂虽然住一定程度上克服了化学农药的缺点,但见效’慢、杀虫谱窄、受环境影响大。林木抗虫基因工程的发展为防治害虫开辟了一条新途径。与传统的害虫防治方法相比,不仅具有选择性强、投资少、见效快的优点,并对于植物的保护作用具有连续性、全面性,大大地缩短育种周期。因此,林木抗虫基因工程研究具有巨大的经济效益和生态效益。与其他防治虫害的方法比较,利用基因工程培育抗虫林木新品种和新品系具有以下几个明显的优点:;ぷ饔镁哂辛裕煽刂屏帜菊錾ぶ芷谀诤Τ娴奈:Γ对整个林木都有保护作用,包括化学杀虫剂