文档介绍：分子生物学生物化学与分子生物学教研室薛美兰目录 PCR 的概念 PCR 技术的创建 PCR 的原理 PCR 的反应体系和方法 PCR 反应条件优化 PCR 的类型和应用 PCR 的概念: PCR ( polymerase chain reaction) 聚合酶链式反应,又称体外 DNA 扩增技术。 PCR is to make a huge number of copies of a gene in vitro . ?DNA 的复制?聚合酶链反应的发明 TAGC 5’3’ TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 3’5’解旋酶解链酶 DNA 解旋解链合成引物子链延长 PCR 技术简史 PCR 技术简史?DNA 的复制?聚合酶链反应的发明 TAGC 5’3’ TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 3’5’ DNA 解旋解链合成引物子链延长 GGAUCG 5‘ AUCGCG 5‘引物酶引物酶 RNA 引物 RNA 引物PCR 技术简史?DNA 的复制?聚合酶链反应的发明 TAGC 5’3’ TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 3’5’ DNA 解旋解链合成引物子链延长 GGAUCG 5‘ AUCGCG 5‘ TAGCGCTATCGCATCGACGCT 3’ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG 3’ DNA 聚合酶 DNA 聚合酶 PCR 技术简史?DNA 的复制?聚合酶链反应的发明?1971 年, Khorana 提出:经过 DNA 变性, 与合适引物杂交,用 DNA 聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆 tRNA 基因。?但由于测序和引物合成的困难,以及 70 年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能,所以, Khorana 的设想被人们遗忘了…… PCR 技术简史?DNA 的复制?聚合酶链反应的发明?1985 年,美国 PE- Cetus 公司的 Mullis 等人发明了聚合酶链反应( PCR ) ?基本原理是在试管中模拟细胞内的 DNA 复制?最初采用 E-coli DNA 聚合酶进行 PCR , 由于该酶不耐热,使这一过程耗时,费力,且易出错?1988 年,耐热 DNA 聚合酶的应用使得 PCR 能高效率的进行,随后 PE- Cetus 公司推出了第一台 PCR 自动化热循环仪?1993 年, Mullis 等因此项技术获诺贝尔化学奖 1. In April, 1983, Kary Mullis took a drive on a moonlit California mountain road. During that drive, he conceived the Polymerase Chain Reaction (PCR) HISTORY HISTORY lives in a small apt. near the beach 2. He received a $10K bonus from Cetus , Cetus later sold the technolgy to La Roche for $300 million “ I do my best thinking while driving ” 1993 Nobel prize 1989 1989 年美国年美国《《Science Science 》》杂志列杂志列 PCR PCR 为十余项重大科学发明之首为十余项重大科学发明之首, , 比喻比喻 1989 1989 年为年为 PCR PCR 爆炸年爆炸年,Mullis ,Mullis 荣获荣获 1993 1993 年度诺贝尔化学奖。年度诺贝尔化学奖。