文档介绍：果蔬中总糖及还原糖含量的测定一、实验目的 1、掌握总糖和还原糖含量的测定方法。 2、学****分光光度计的原理和操作方法。 3、了解蒽***法测定可溶性糖含量的原理。二、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本实验条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。多糖为非还原糖,可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖,再利用还原糖的性质进行测定,这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糖醛,生成的糖醛或羟***糖醛可与蒽***反应生成蓝绿色糖醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比。糖类与蒽***反应生成的有色物质,在可见光区的吸收峰为 630nm ,可在此波长下进行比色,故可用于糖的定量。三、实验器材 1、材料:梨 2、仪器:分光光度计、恒温水浴锅、电子分析天平、高速冷冻离心机、容量瓶( 100mL ×2)、玻璃漏斗、量筒、研钵、锥形瓶、试管、移液管、 pH 试纸 3、试剂: 蒽***试剂:取 2g蒽***溶于 1000mL 体积分数为 80% 的硫酸中,当日配制使用。标准葡萄糖溶液( ) :称取 100mg 葡萄糖,溶于蒸馏水并稀释至 1000mL (可加几滴甲苯作防腐剂)。 6mol/L HCl 溶液 20% NaOH 溶液:称取 20g NaOH 固体,溶于蒸馏水并稀释至 100mL 。四、实验操作 1、葡萄糖标准曲线的绘制: 取 6支大试管,从 0~ 5分别编号,按下表加入各试剂试剂管号 012345 标准葡萄糖溶液/ml 蒸馏水/ml 置冰水浴中 5min 蒽***试剂/ml 煮沸 10min ,冷却后室温放置 10min ,在 620nm 处比色 A620nm 以吸光度为纵坐标,各标准液浓度( mg/mL )为横坐标做图得标准曲线。 2、样品中还原糖的提取和测定称取 1g梨,加蒸馏水约 3mL ,在研钵中磨成匀浆,转入三角烧瓶中,并用约 12 mL 蒸馏水冲洗研钵 2~ 3次,洗出液也转入三角烧瓶中。于 50℃水浴中保温约 30min (使还原糖浸出) ,取出置于离心管内, 5000r/min 离心 10min ,冷却后定容至 100mL 。吸取 1mL 滤液置于试管中,浸于冰浴中冷却,再加入 4mL 蒽***试剂,沸水浴中煮沸 10min ,取出冷却后比色,其他条件与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。 3、样品中总糖的提取、水解和测定称取 1g梨,加蒸馏水水约 3mL ,在研钵中磨成匀浆,转入三角烧瓶中,并用约 12mL 蒸馏水冲洗研钵 2~ 3 次,洗出液也转入三角烧瓶中。再向三角烧瓶中加入 6mol/L 盐酸 10mL ,搅拌均匀后在沸