文档介绍：中南大学
博士学位论文
NGX6基因抑制高转移鼻咽癌细胞株5-8F侵袭与转移行为的研究
姓名:王莉莉
申请学位级别:博士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:李桂源
20050501
基因抑制高转移鼻咽癌细胞株侵袭与转移行为的研究摘要【基因的克隆、生物信息学特征、前期的功能研究结果】细胞和分子遗传学研究发现,鼻咽癌基因组存在高频率、、染色体的等位基因的杂合性丢失。我室阳剑波博士从区域采用定位候选克隆的方法克隆了一个新基因,锹己盼,它的表达在鼻咽癌中明显下调,可能为一个与鼻咽癌相关的预测分子量个跨膜结构域,,胞内区较短,含有隼野酸激酶磷酸化位点。基因前期功能研究结果:在鼻咽癌活检组织、鼻咽癌上皮细胞株中表达下调甚至缺失,而在正常鼻咽组织中存在明确的表达;基因在结直肠癌中亦存在不同程度的表达下调,伴有淋巴结转移的结直肠癌样本中Ⅸ泶锵碌鞯谋壤门远高于无淋巴结转移的结直肠癌样本.@酶咄康淖橹酒性辉咏实验发现,基因的表达在有转移的肿瘤组织下调更明显,且与临肿瘤抑制候选基因。生物信息学显示:基因全长,编码氨基酸觯博士研究生:王莉莉导师:李桂源教授中南大学湘雅医学院肿瘤研究所
实细的结果是可靠的。在结肠癌细胞的恶性表型得到部分逆转;可通过疪腁途径负调控【具有抑制鼻咽癌细胞增殖和侵袭转移的作用】的生物信息学特征和初步研究结果提示基因可能在鼻咽癌的侵袭与转移中发挥抑制性的作用。床分期相关。基因分别转染鼻咽癌和结肠癌细胞之后可使鼻咽癌和增殖信号通路;利用绿色荧光蛋白发现的亚细胞定位主要是细胞膜;免疫共沉淀实验中发现可与作为细胞运动和转移调节者本研究在前期工作的基础上,结合的生物信息学特征,为进我们以具有高转移特性的鼻咽癌细胞赴Q芯慷韵螅诠菇的真核表达载体./基础上,通过脂质体转染方法将基因导入鼻咽癌细胞校⒂肎秆。琍、二和咏患ǎ⒘。达对赴虮泶锲椎挠跋臁J躈弑泶镉跋欤龌虮达发生改变,其中个是受基因高表达影响而表达水平上调,个表达水平下调。其中一些是与肿瘤增殖、侵袭转移相关的基因,用可以改变作用于肿瘤转移多个环节的基因的表达水平,涉及细胞周期、信号传导、细胞黏附、血管生成和细胞外基质降解等。增殖生物学行为进行了检测。结果显示:转染了基因的赴的緄⑸换プ饔谩,一步明了在鼻咽癌的侵袭与转移中的作用,进行了如下实验:利用公司的芯苛薔赘弑验证了部分差异表达基因是否在蛋白质水平也存在差异,证钜旎蛑锌梢钥闯借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验和流式细胞仪对转染细胞的
这些结果说明基因在鼻咽癌的增殖和转移中具有抑制作用。【抑制鼻咽癌细胞增殖的机制】的赴逋馇窒芰ο陆担苫指幢茄拾┫赴募湎读酉细胞的肺转移。加上在临床标本检测中发现在结直肠癌中的表达的生长速度明显减慢,在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降,采用流式细胞仪检测与分析细胞周期及细胞周期素的改变,并用验证。结果显示稳定表达的赴隙哉兆橄赴芷谥蠫疓比例明显增加,而诒壤跎伲赴蛲雎饰廾飨员浠A魇较赴羌测发现、虯的表达明显减少,以的改变最为明显。检测也发现的表达明显下调。以上结果说明通过体外侵袭实验、黏附率实验、划痕实验和体内鼠白发性动物转移模型对转染细胞的侵袭转移行为进行检测。实验表明:稳定表达胞间通讯,黏附能力增强;进一步的鼠接种实验也表明,表达水平的提高的确可使鼠体内成瘤的时间明显延长,将肿瘤进行病理水平与淋巴结转移呈负相关;高通量的组织芯片原位杂交实验发现的表达在有转移的肿瘤组织下调更明显,且与临床分期相关,这些都是肿瘤细胞与侵袭转移相关恶性表型得到改善的表现。。流式细胞仪检测发现、虯的表达明显减少,┫赴墓仍鲋场切片,均为低分化鳞癌,肺组织切片显示高表达能显著抑制以的改变最为明显。和荊谥饕5男вο胞周期素,在许多肿瘤中表现为过度表达,且过表达的是鼻咽癌细胞期行进必不可少的蛋白质之一,过表达的可
峁猩篈荝爪鄙截信号通路号通路。们皿房赏ü嘀只拼俳赴芷贕畇的进程。所以,通过负调控价皿Ⅺ信号通路而间接抑制细胞路:Ⅷ认籛信号通路:、细胞黏附呓、中的分子,高表达可抑制蟂、表达从而负调控该信【抑制鼻咽癌细胞侵袭转移的机制】以缩短细胞期,促进细胞进入冢赴子诒蛔;恢泻突蛞种芻的表达,可以使细胞阻滞在期。结果提示Ⅸ赡苁峭ü—荌家族成员,是/,涉及细胞周期⑿藕糯ǖ信号通基因生物信息学提示:隹缒そ峁褂蛩得鱊弑缸魑D蛋白的基本条件;糖基化位点是许多细胞黏附分子的特征;具有一个酪氨借此参与细胞内信号传递;峁褂蛑饕:褪芴逡慌涮寮浣换プ