粪便细菌DNA的提取.doc

文档介绍：粪便细菌DNA的提取
-（冰水浴），加入1mlPBS，漩涡振荡混匀，200xg离心5min，取上清，冰水浴；
向沉淀中加入1mlPBS，重复步骤1；
混合两次上清，用300g离心5min，弃沉淀；
两次上清用10000rpm离心8min，沉淀菌体；
所得沉淀用1mlPBS洗涤至上清无色；
-20℃过夜；
向Ep管中加入500ulDNA提取液，6ul蛋白酶K，37℃摇床160rpm摇40min，再加入56ul20%SDS，65℃条件下水浴2h，每隔15-20min轻摇Ep管；
等体积酚/***仿抽提，8000rpm离心10min，取上层水相，重复两次，除净蛋白；
，12000rpm离心10min（4℃）；
用70%乙醇洗涤DNA沉淀两次，自然干燥；
沉淀中加入15ulTE，在37℃孵育箱中孵育30min。
DNA提取液（）
100mmol/L Tris-HCL
100mmol/L Na2EDTA
100mmol/L 磷酸钠
mol/L NaCL
1% CTAB（100ml提取液含CTAB1g）
Tips：
此DNA可在4℃贮存6个月，-20℃保存时间更长，但要注意避免反复冻融，以免剪切高分子量DNA。
混匀时不要用力振摇，以免DNA断裂。
Tris饱和酚：***仿：异戊醇=25:24:1