文档介绍：纤维素 CMC 酶、 FPA 酶和半纤维素酶测定 1. 纤维素 CMC 酶 标题用 一二硝基水杨酸法测定纤维素 CMC 酶活性单位。 范围生产分析和质量控制部门适用。 原理纤维素 CMC 酶( ) 水解羧基纤维素分子中β- 葡萄糖苷键, 释放出的还原糖(以葡萄糖计)与 二硝基水杨酸(DNS) 反应, 产生颜色变化, 这种颜色变化与释放还原糖(以葡萄糖计) 的量成正比关系, 即与酶样品中的酶活性成正比。通过在 550nm 的光吸收值查对标准曲线(以葡萄糖为标准物) 可以确定还原糖产生的量, 从而确定出酶的活力单位。 试剂 无水醋酸钠( 分析纯) 冰醋酸( 分析纯) -二硝基水杨酸 无水葡萄糖 四水酒石酸钾钠( 分析纯) 氢氧化钠( 分析纯) 重蒸苯酚( 分析纯) 无水亚硫酸钠( 分析纯) 叠氮化钠( 分析纯) 羧***纤维素钠 仪器 水浴锅( 恒温)50 ±1℃ 电热干燥箱 80±1℃ 722 型分光光度机计 分析天平感量 ㎎ 一级玻璃制品 电冰箱 试剂的准备 乙酸-乙酸钠缓冲溶液( PH= ) 溶液 A :量取冰醋酸 6ml ,定容至 1000ml ,制成 醋酸钠溶液。溶液 B :称取 醋酸钠,溶解后容至 1000ml ,制成 醋酸钠溶液。以A: B=4 :6 的比例混合,低温冷藏备用。 DNS 试剂: 溶液 A: 称分析纯 NaOH 104g 溶于 1300ml 水中, 加入 30g 分析纯 一二硝基水杨酸。溶液 B: 称分析纯酒石酸钾钠 910g , 溶于 2500ml 热水中, 再称取 25g 重蒸苯酚和 25g 无水亚硫酸钠加入酒石酸钾钠溶液。将A、B 溶液混合,定容至 5000ml ,贮存于棕色瓶中,暗处放置一星期后可使用。 CMC 溶液:用羧***纤维素钠( CMC )以 醋酸缓冲液配成 1% 的溶液。 标准曲线制作: 无水葡萄糖 80℃烘干至恒重。 准确称取 溶于 1000ml 水中,加 10mg 叠氮化钠防腐, 4℃冷藏备用。 标准葡萄糖曲线制作取 1mg/ml 标准葡萄糖液各 0, ,,,,, 补加水至 , 加入 试剂, 具塞, 沸水浴中加热 10 分钟, 冷却后定容至 15ml, 分光光度计 550nm 波长下测 OD值,3 次重复实验的均值用最小乘法相拟合 Y=ax+b 一元线性方程。由光密度值引得葡萄糖量。 CMC 酶活性测定。 活性定义: 1g 酶粉( 1ml 酶液)于 50℃ 条件下,每分钟水解 1%CMC 溶液产生 1μg 还原糖(以葡萄糖计)的酶量定义为 1个 CMC 酶活力单位。 分析程序: 取三支 15ml 刻度试管分别加入 稀释酶液,在分别吸取 溶液,50 ℃水浴保温 30 分钟, 空白样用 l 稀释酶液, 加入 1.