文档介绍：大果山楂组织培养的研究
　　【摘要】本研究以大果山楂辽红的腋芽为外植体,研究了组织培养获得无菌试管苗的方法。获得了无菌试管苗,确定了腋芽增殖培养基、继代培养基、适宜的生根培养基为。
　　【关键词】大果山楂组织培养
　　基金项目:国家转基因专项(JY04-B-02)
　　
　　本文采用组织培养技术,短期内可获得大量种苗,对其种质资源保护、培育优良种苗;为山楂生物技术的进一步研究和发展提供有利的依据。
　　 1. 材料与方法
　　试验材料与试验地点
　　植物材料:大果辽红山楂
　　试验地点:吉林省农业科学院生物技术重点开放试验室
　　
　　将已展叶3―5片的山楂枝条用洗洁精刷洗干净,切取单芽,流水冲洗30min,对单芽用70%酒精灭菌10s, 无菌水冲洗3―4次,%HgCl2消毒(时间设置3, 5, 7, 9 min),无菌水冲洗6次,调查不同的灭菌时间对污染率、褐化率和死亡率的影响。
　　初代培养基的筛选:以MS、WPM、NN69为基本培养基,附加BA(, , )、NAA(0, , mg/L)、GA3(0, , mg/L)不同组合,共10个处理将消毒好的外植体放在滤纸上吸干水分,接种在启动培养基上,观察外植体在不同培养基中的萌动情况,30天后统计茎段腋芽萌发得百分率与增殖倍数。
　　生根培养基的筛选:将长势相当的试管苗切成1―2cm长的茎段,接种在1/2MS,1/4MS,1/,蔗糖浓度设五个梯度10, 20, 30, 40, 添加IBA(, , , , mg/L),NAA(, , , mg/L)。暗培养7d,在光下培养。纪录根发生情况(蔗糖浓度20g/L)。其中每个处理均为10瓶,每瓶3株。
　　 2 .结果与分析
　　 HgCl2处理对外单芽植体的影响
　　结果表明:单芽外植体随灭菌时间由3min延长到9min,污染率呈下降趋势,死亡率和褐化率都呈上升趋势。HgCl2处理3min,灭菌不彻底,污染率极高。灭菌9min虽然污染率低,但褐化率和死亡率极高,当灭菌时间为7min时,单芽外植体污染率、死亡率和褐化率都处于一个相对中间值,因此HgCl2对山楂单芽外植体的处理时间以7min最适宜。
　　 2. 2 基本培养基对外植体萌动的影响
　　本试验采用常用的3种木本植物基本培养基MS,WPM,B5,,。结果表明在MS培养基上分化出的新芽绿色粗壮,伸长生长较明显;WPM培养基上随着新芽的分化,底部出现白色的愈伤,随着培养天数的增加,新芽出现黄叶现象;B5培养基上,分化出新芽后,在芽的基部不断地长出新的叶片,而新芽几乎不长高。由此可见,MS培养基比较适合辽红山楂外植体的初代培养。
　　
　　以初代培养成活的芽为外植体,研究不同激素组合对芽伸长生长的影响。结果如表1所示,外植体在10种培养基中均可伸长生长,但是在不同的处理中芽伸长百分率明显不同。在NAA