文档介绍：1 前言 2 实验目的 3 实验原理枸杞多糖提取原理萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。通过萃取,能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。它的基本原理是利用化合物在两种不相溶(或微溶)的溶剂中溶解度或分配系数的不同,使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。经过反复的多次萃取,将绝大部分的化合物提取出来。萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。在本次实验中,是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物,属于液-固萃取。多糖类化合物的溶剂提取,溶剂的选择是根据原料中被提成分,即多糖类化合物的极性、共存杂质的理化特性,遵循相似相溶的原则,使有效成分从原料固体表面或组织内部向溶剂中转移的传质过程。一般而言,分子的极性依据活性基团的种类和数目、分子的缔合程度大小进行判断,分子中含有羟基或羧基基团越多,极性就越大,亲水性就越强;反之极性就越小,亲脂性越强。要把存在于植物细胞中各种水溶性多糖完全地提取出来, 一般要求将试样尽可能地粉碎。根据枸杞果实细胞的特点及其含有大量的还原糖(40% ~50%) 不宜粉碎等情况, 采用了机械成浆或剪碎成细粒后再行提取。脱蛋白常用的去除多糖中蛋白质的方法有: Sevage 法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法,这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀。从资料知,枸杞子水溶性蛋白质为 % ,这些蛋白质无论是游离态或以糖肽结合态进入热水中,在沉淀多糖的浓乙醇溶液中均被沉淀下来。为了除去能与多糖一起沉淀的游离蛋白质,许多人在提取分离流程中采用了 Sevage 法脱蛋白质手续。Sevage 方法脱蛋白效果较好,它是用氯仿:戊醇或丁醇,以 4:1 比例混合,加到样品中振摇, 使样品中的蛋白质变性成不溶状态,用离心法除去。 Sevage 法:利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点,将提取液与 Sevage 试剂[氯仿:正丁醇=5:1(V/V )]5:1混合,振荡,离心,变性后的蛋白质介于提取液与 Sevage 试剂交界处。此法的优点是条件温和,不会引起多糖的变性。乙醇沉淀多糖的适宜浓度要使枸杞多糖完全地沉淀出来,并尽量减少对杂质的吸附,待沉淀的多糖浓缩液中多糖含量及用乙醇沉淀时在全部溶液中乙醇的最终浓度都要适度。为此,根据已知资料和我们的实验数据,待沉淀液中多糖含量在 2% 以下为宜,即 200g 枸杞子经有机溶剂脱脂和用 80% 乙醇回流提取单糖等杂质后,再用热水提取多糖并将此溶液浓缩到 500ml 即可。当用 95% 乙醇沉淀时,加入 500ml 后开始出现沉淀(此时乙醇浓度为 %) ,在充分搅拌的同时,继续加乙醇到上清液不再产生沉淀为止,共加入 95%乙醇 2000ml( 即乙醇的最终浓度为 76%) 。因此,在 80% 乙醇浓度下,枸杞多糖可完全地沉淀出来。但是,在用热水直接提取法中,由于提取液中水溶性成分多,杂质浓度大且不易浓缩,沉淀液体积大一些为好,这样再用乙醇沉淀出多糖时,可减少对单糖等杂质的吸附作用。另外,用乙醇反复多次进行沉淀,当加入乙醇到 80% 浓度后还不出现沉淀时,向沉淀液中加入少量(最终浓度为 1%~2%) 的醋酸钠,以提高溶液的离子强度,放置后多糖即凝聚而沉淀。所以,本实验研究直接用 80% 乙醇溶液提取。测定枸杞多糖含量的原理: 多糖在硫酸的作