文档介绍：:生物化学与分子生物学朱运松教授刘银坤教授曩荫薅商薏院系:专业:姓导师:导师组成员:完成日期:上海医学院张丽君李平讲师年学校代码:学号:匀垒定公布,
人肝癌细胞系中转移相关酪氨酸磷酸化中文摘要第一部分蛋白质的差异分析移和复发过程中通常会发生改变。本研究通过对不转移人肝癌细胞系与具有低、高转移潜能的人肝癌缅胞系/黼的酪氨酸磷酸化蛋转移复发是影响肝细胞癌术后患者预后和生存期限的最大障碍,如何早发现、早诊断、有效抑制肝癌转移和复发成为进一步提高疗效的关键。因此,寻找具有临床价值的转移、侵袭指标成为热点。比较蛋白质组学作为多基因、多因素复杂病理机制研究的有效手段,可以大规模、高通量地筛选在疾病发生发展中起重要作用的关键蛋白质分子。虽然蛋白质序列能从核酸序列中推演出来,翻译后修饰却不能,以此成为一大难题。在众多分子标记物中,磷酸化蛋白质日益受到重视。其中蛋白质的酪氨酸磷酸化修饰在调控细胞增殖、分化、信号传导和代谢等生命过程以及某些疾病的发生发展中都起着非常重要的作用,在恶性肿瘤的转白质表达谱差异分析,期冀找到与R聘捶⑾喙氐墓丶野彼崃姿峄鞍字分子。利用三种不同方法从不同角度筛出一些差异蛋白质,并对其中的膜联蛋白辛嗽傺橹ぁ优化双向凝胶电泳,蛋白;<袄野彼崃姿峄鞍字矢患喙丶际酰⑾对稳定、适合本实验室的技术平台,联合质谱技术,筛查在肝癌转移过程中发挥重要作用的差异酪氨酸磷酸化蛋白质分予。采用三种不同的方法,从不同角度和层面对三种具有不同转移潜能的人肝癌细胞系中酪氨酸磷酸化蛋白质表达谱进行检测分析:一鞍子〖.猅—/方法:,得到膜联蛋白热休克蛋白等个差异点。妹庖叱恋差异条带猅—/方法:,胶上酶解,作差异条带质谱检测分析。在屑ǔ个表达上调的酪氨酸磷酸化蛋白质。在蚆中鉴定出霰泶锷系鞯睦野酸磷酸化蛋白质。妹庖叱恋全酪氨酸磷酸化蛋白质~狹疢方法:在屑ǔ个酪氨酸磷酸化蛋白质,建立了不转移人肝癌细胞系睦野彼崃姿峄鞍字时泶锲住T谙嗤跫露哉誋、闹势准ń峁5玫个差异酪氨酸磷酸化蛋白质分子。与不转移肝癌细胞系口相比,转移性肝癌细胞系酪氨酸磷酸化蛋白质表达谱表现出明显的差异性。推测肝癌转移侵袭机制与细胞内多种酪氨酸磷酸化蛋白质异常表达相和复旦大学级硕士学位论文
第二部分转移潜能不同人肝癌细胞系中差异酪氨酸磷酸化蛋白质的再验证结论立了适合筛查磷酸化蛋白质的技术平台。为保证差异酪氨酸磷酸化蛋白质筛选结果的可信度及下游分析的确定性,我们选取差异蛋白质中的膜联蛋白辛嗽傺橹ぃτ冒攵磕孀B季酆厦噶词反应狿⒌鞍子〖拖赴庖呋Ъ际踔な的ち蛋白娜吩谟凶R魄蹦苋烁伟┫赴疢懈弑泶铩ü一、酪氨酸磷酸化蛋白质富集技术的摸索和优化,联合质谱技术建⒘瞬蛔R迫烁伟┫赴礖的酪氨酸磷酸化蛋白质表达谱。氩蛔R迫烁伟┫赴迪啾龋R菩匀烁伟┫赴抵欣野彼崃姿峄鞍字时达谱表现出明显的差异性。推测肝癌的侵袭转移性与细胞内多种差异表达的酪氨酸磷酸化蛋白质相关。τ肦狿,,免疫细胞化学技术对筛选出的膜联蛋自进行再验证,结果显示前后一致。关键词人肝癌细胞系转移复发酪氨酸磷酸化蛋白质免疫沉淀猅—/—玀疢ち5鞍譏免疫细胞化学中图分类号:本课题的创新点利用三种方法从不同转移潜能人肝癌细胞系和筛选出膜联蛋白⒛ち5白訧等多种差异酪氨酸磷酸化蛋白质分子,并建立了不转移人肝癌细胞系睦野彼崃姿峄鞍字时泶锲住缩写词焊蜗赴愿伟核蚰旱缬荆籑—狹疢基质辅助激光解析电离飞行时间质谱;—狹疢阂合嗌滓坏缗缥硪淮V势祝篟狿:逆转录聚合酶链式反应::磷酸化酪氨酸关。复目人学级碰十学位论文籇—
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前言碍。因此如何早发现、早诊断,寻找具有临床价值的窒栽げ庵副辏本是复杂的蛋白质混合物。通常,样本蛋白质先由胰蛋白酶酶解成肽段,形成多肝细胞癌琀且恢钟啥嗷颉⒍嘁蛩匾⒌病理机制复杂的常见恶性肿瘤,位居全球恶性肿瘤死因的第三位,每年约有~蛉怂烙诟伟浞⒉÷试谧罱曛忻飨陨仙齀8貌《喾⒂诜侵蕖⒅泄和东南亚地区,约有%以上的原发性肝癌在我国,是位居第二的癌症杀手【。该病一般诊治较难,病情进展快,整体治疗效果较差。「伟┦鹾笪迥晟媛饰%【。尽管临床采取了免疫治疗、预防性爸幸┲瘟频却胧├丛し栏伟┣谐鹾蟮淖R聘捶ⅲ但是总