分光光度法(金).ppt

文档介绍：分光光度法和 722分光光度计的使用
The Depart. of Biochemistry
Shenyang Medical Institute

利用物质所特有的吸收光谱对物质进行鉴别和定量测定的方法叫做~。

1)分光光度法的核心原理 ——比色分析法
待测物 + 呈色剂
有色溶液
以溶液呈色的深浅判断其浓度
2)分光光度法的核心定律 —— Lambert-Beer 定律
当单色光透过某种有色溶液时,
溶液的光密度(OD)与溶液的厚
度和浓度成正比.
OD = K L C
OD
光密度值（Optic Density)
K
消光系数(为常数)
L
溶液厚度
C
溶液浓度
有色溶液
I0
Ia
I
反射光
分散光
其他因素损失光
则，I0
=
Ia
+
I
+
反射光
分散光
+
+
其他因素损失光
干扰因素
空白管
不含待测样品，且具备其他一切光学因素
经空白管校正后：
I0
=
Ia
+
I
则，透光率T
=
I
I0
经空白管校正后，我们可以认为，透光率T的变化完全取决于待测样品含量的多少。
Lambert 定律：
当单色光透过某种有色溶液时，透过光强
度随液层厚度增加而指数地减弱。
I = I0×10-KL
则，透光率T =
I
I0
=
I0×10-KL
I0
=
10-KL
则，光密度D =
-㏒T
=
-㏒10-KL
KL
=
Beer 定律：
当单色光透过某种有色溶液时，透过光强
度随溶液浓度增加而指数地减弱。
I = I0×10-KC
则，光密度D =
KC
则，Lambert-Beer 定律为：
D = K L C